비둘기 헤르페스 바이러스 (PiHV) 핵산 테스트 키트 (UNG, PCR-형광 프로브 방법)

제품 번호: AP2409002 사양: 50티/100티 저장: -20℃

제품소개:

비둘기 헤르페스 바이러스 (PiHV) 비둘기 헤르페스 바이러스 유형으로 인한 젊은 비둘기에 주로 영향을 미치는 바이러스 감염성 질환입니다. 1 (PIHV1). 젊은 비둘기에서 비둘기 스쿼트 질병 증후군으로 이어지는 중요한 병원체입니다.. 임상 적으로, 비강 및 결막 염증과 같은 증상이 특징입니다.. 감염된 비둘기도 우울증을 나타낼 수 있습니다, 식욕 감소, 설사, 구토, 및 신경 학적 증상. 그러므로, 일찍, 빠른, PIHV의 편리한 검출은 진단에 중요합니다, 질병의 확산을 늦추는 것, 그리고 합병증 예방. 이 테스트 키트는 PIHV 유전자의 보존 된 서열을 기반으로 설계되었습니다., 최적화된 조건으로, 정확한 형광 정량 가능 PCR 구강 테스트, 배설강 면봉, 피, 및 기타 새의 조직 샘플. 이것은 호스트가 PIHV에 감염된 지 여부를 빠르게 결정할 수 있습니다..

상품 내용:

시약 구성 요소	AN2409002-02 (50티)	AN2409002-03 (100티)
PIHV 테스트 시약	1150μL	1150µL × 2
PIHV 양성 대조군	100μL	100μL
부정적인 제어	100μL	100μL

보관 조건:

-20℃에 보관, 유통기한은 적어도 12 개월.

실험적 운영:

1. 샘플 준비 (샘플 준비 영역)

1.1 샘플 요구 사항:

-구강/클로칼 면봉: 멸균 면봉을 사용하여 새의 목이나 Cloaca에 삽입하십시오., 세 번 회전합니다. 그것을 제거하고 원심 분리 튜브에 넣으십시오, 노출 된 부분을 차단합니다, 그런 다음 튜브에 단단히 캡을 캡처하고 라벨을 붙입니다. 내에서 테스트 할 수있는 샘플 24 시간은 2-8 ° C에서 저장 될 수 있습니다; 즉시 테스트 할 수없는 샘플은 -20 ° C에서 저장해야합니다..

-전혈: EDTA를 항응고제로 사용; 헤파린을 사용하지 마십시오. 신선한 전혈이 필요합니다, 또는 2-8 ° C에 저장할 수 있습니다. 7 날, 또는 더 이상 -20 ° C에서 3 개월. 반복적 인 동결-해동주기는 가능한 한 많이 피해야합니다..

-조직: 신선한 간 조직을 초과하지 않습니다 100 mg, 후속 샘플 준비를 위해 200-500μl의 멸균 물을 사용하여 조직 균질 물을 준비하십시오..

1.2 샘플 준비:

Sanshibio를 참조하십시오 “동물 게놈 DNA 빠른 추출 키트 (PCR 분석을 위한) 수동” (카탈로그 번호: DP202), 또는 관련 요구 사항을 충족하는 기타 핵산 추출 키트/방법, 가공 된 샘플로부터 핵산을 추출한다. 추출 된 핵산 샘플은 아이스 박스에 넣고 가능한 빨리 테스트해야합니다.; 그들은 4 ° C에서 더 이상 저장할 수 있습니다. 7 일 또는 -20°C 이하에서 6 개월.

2. 반응 시스템을 준비하십시오 (샘플 추가 영역)

2.1 키트의 각 구성품을 꺼내세요., 실온에서 완전히 해동, 그리고 원심 분리기 10 튜브 벽에서 액체를 수집하는 데 초와 바닥의 캡. 샘플 수에 따라 반응 시스템 준비 (n+2) (즉., n 테스트 샘플 + 1 양성 대조군 + 1 음성 대조군). 구체적으로, 준비하다 (n+2) PCR 튜브, PIHV 테스트 시약 23μl를 각 튜브에 분배, 나중에 사용하기 위해 아이스 박스에 보관하십시오..

2.2 그 다음에, 2μL의 음성 대조군을 순차적으로 첨가하십시오, 추출된 샘플 핵산, 및 시험 시약에 대한 PIHV 양성 대조군. 튜브를 단단히 캡처하고 정보를 기록하십시오; 각 반응의 총 부피는 25μL이어야합니다. 잘 섞어주세요, 원심분리기 10 초, PCR 기기에서 증폭 실험을 수행합니다.

3. PCR 증폭 (증폭 및 제품 분석 영역)

50° C UNG 효소 오염 제거 2 분; 95° C 사전 감도에 대한 2 분; 95° C 변성 10 초, 60 ° C 어닐링 및 확장 35 초, ~을 위한 40 사이클, 60 ℃에서 형광 신호 수집. 형광 채널 FAM을 선택하십시오 (ABI 시리즈 또는 유사한 실시간 정량적 PCR 기기를 사용하는 경우, 필요한 경우 미리 제조업체에 연락하거나 Rox Calibration Dye를 추가하십시오.; 그렇지 않으면, 정상적인 절차를 따르세요).

4. 결과판정

4.1 실험 결과를 검증하기위한 조건:

양성 대조군 FAM 채널 Ct 값 < 28 그리고 전시합니다 “에스” 모양의 증폭 곡선; 음성 대조군에는 Ct 값이 없거나 Ct 값 ≥이 있습니다. 38 그리고 아니 “에스” 모양의 증폭 곡선, 유효한 결과를 나타냅니다; 그렇지 않으면, 실험을 반복하다. 재설정이 유효하지 않은 경우, 제조업체의 기술 담당자에게 문의하십시오..

4.2 샘플 결과 결정:

Ct 값 ≤ 33 그리고 전시합니다 “에스” 모양의 증폭 곡선, PIHV 양성으로 판단됩니다;

Ct 값 33 < 코네티컷 < 38 의심스러운 것으로 간주됩니다; 리테스트가 권장됩니다 (핵산 추출은 표준 이하일 수 있거나 강한 억제 오염 물질이있을 수 있습니다. (예를 들어, 소독제로부터의 잔류 물, 항응고제) 증폭 억제; 핵산 추출 및 증폭에 대한 샘플을 재 처리 제안; 우선 핵산을 다시 추출하고 재검토하기 전에 에어로졸 오염으로 인한 잘못된 긍정적 인 결과를 배제합니다.). 에어로졸 오염이 배제되고 FAM 채널이 CT 가치를 재조정하는 경우 < 33 명확한 증폭 곡선, PIHV 양성으로 결정됩니다; 그렇지 않으면, 부정적으로 판단됩니다;

Ct 값 없음 또는 Ct 값 ≥ 38 그리고 아니 “에스” 모양의 증폭 곡선은 PIHV 음성으로 결정됩니다.

지침:

• 오염을 방지하기 위해, 실험은 엄격하게 분할되어야 한다, 인적 요인으로 인한 교차 오염을 피하기 위해 파티션 간의 물리적 격리가 선호됩니다.. 실험 중에는 실험실 가운과 라텍스 장갑을 착용하십시오., 다양한 영역에서 도구를 독립적으로 사용, 필요할 때 장갑과 실험복을 갈아 입으세요.. PCR 후, 즉시 뚜껑을 열지 마십시오; 에어로졸 오염을 최소화하기 위해 충분히 식힌 후 개봉하십시오..
• 사용하기 전에 시약을 완전히 해동하십시오., 그러나 반복적인 동결-해동 주기는 피하십시오.. 키트에 제공되는 PCR 반응 튜브는 0.2mL입니다.; 교체가 필요한 경우, 완전 해동 후 이송. 시약 준비 및 샘플 추가에 대한 지침을 엄격히 따르십시오.. 워크스테이션, 원심분리기, 피펫, 기타 기구는 염소 함유 소독제로 정기적으로 소독해야 합니다., 술, 핵산 오염 제거제, 아니면 자외선.
• 부정적인 결과가 반드시 호스트가 바이러스에 감염되지 않았다는 것을 의미하지는 않습니다.. 샘플 품질이 좋지 않음, 낮은 바이러스 부하, 또는 강력한 억제 물질의 존재 (알코올과 같은, 소독제, 항응고제, 등.) 핵산 추출에 실패할 수 있습니다. (발각) 그리고 “부정적인” 결과. 결과 해석 기준을 따르십시오., 그리고 의심스러운 결과가 있을 때, 먼저 에어로졸 오염을 제외합니다.. 다른 질문이 있는 경우, 제조업체의 기술 담당자에게 문의하세요..
• 본 제품은 일회용입니다. 시약의 구성 요소는 자연광에 민감합니다.; 포장 및 보관 중 빛 노출을 피하십시오.. 포장 후, 반복적으로 동결-해동하지 마십시오. 과학 연구용으로만 사용; 임상 진단이나 기타 목적이 아닌 경우.