파라핀 포매 조직 DNA 추출 키트

1. 시약 키트의 구성 요소

명세서	50티	100티
고양이. 아니요.	SN0251	SN0252
DNA 추출 컬럼 (세트)	50 (세트)	100 (세트)
시약 완충액 IV	20 밀리리터	2 × 20 밀리리터
시약 완충액 C	30 밀리리터	2 × 30ml
시약 완충액 FF	60 밀리리터	2 × 60ml
세척 버퍼 1	15 밀리리터	2 × 15 밀리리터
용출 버퍼	20 밀리리터	20 밀리리터
단백질분해효소 K	1밀리리터	2x1ml
RNaseA	1밀리리터	2x1ml
사용 설명서	1	1

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) 그리고 건조한 환경에서는, 유효기간이 있는 12 개월. DNA 추출 정제 컬럼은 다음 용도로 보관할 수 있습니다. 1 시원하고 건조한 환경에서 1년 동안. 단백질분해효소 K 및 RNase A 방부제 함유, 실온에서 운송 가능, 하지만 장기간 보관을 위해서는, -20℃에 보관해야 합니다.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 시약 키트는 분자생물학 연구용이므로 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 시약 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.. 보호복, 고글 착용 등의 보호 조치가 권장됩니다..

3.3 이 시약 키트를 사용하는 동안, 고속 원심분리기, 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 멸균 탈이온수, EP 튜브는 사용자가 준비해야 합니다..

4. 시약 키트 소개

 

파라핀 포매 조직 DNA 정제 키트는 파라핀 섹션의 샘플에 대해 빠르고 효과적인 DNA 정제 솔루션을 제공합니다.. 전용 탈왁스 용액을 사용하여 파라핀을 용해시킨 후 조직을 채취합니다., 후속 추출 과정을 통해 샘플 DNA를 얻습니다..

 

본 키트는 파라핀 절편에서 샘플 DNA를 추출할 수 있습니다. 30 분, 전체 정제 과정에서 페놀-클로로포름과 같은 독성 시약이 필요하지 않습니다.. 추출된 DNA는 다음과 같은 목적으로 직접 사용될 수 있습니다. PCR, 서던 블로팅, 및 기타 응용 프로그램.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험을 시작하기 전에:

ㅏ. 시약 완충액 FF:이 완충액은 2°C~8°C 환경에서 장기간 보관해야 합니다..

비. 시약 완충제 IV 및 C 저온 조건에서 침전될 수 있음. 65°C에서 가열하는 것이 좋습니다. 5 분. 침전물이 용해된 후, 솔루션은 정상적으로 사용할 수 있습니다.

씨. 씻다완충기 1 사용하기 전에 지정된 양의 무수 에탄올을 첨가해야 합니다., 시약병 라벨에 표시된 대로. 무수에탄올 첨가를 나타내는 눈금 표시가 있는 라벨을 확인하십시오..

디. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA로. EDTA가 후속 실험에 영향을 미치는 경우, 용리 완충액을 멸균 탈이온수로 교체하는 것이 좋습니다..

 

1. 샘플 처리:

선택하다 5-10 파라핀 섹션 (1mm-3mm 두께), 과도한 왁스를 제거하려면 가위를 사용하십시오., 내장된 조직 샘플을 작은 조각으로 자릅니다.. 1.5ml 원심분리용 튜브에 넣습니다., 추가하다 800μl 시약 완충액 FF, 75°C에서 배양합니다. 5 모든 파라핀이 녹을 때까지 몇 분. 12000rpm으로 원심분리 5 분, 상층액을 버린다.

2. 추가하다 400μl 시약 완충액 IV, 20μl 단백질분해효소 K (10 mg/ml), 및 10μl RNaseA (10 mg/ml) 이전 단계의 침전물로. 65°C에서 소화, 매번 저어 6-7 소화가 완료될 때까지의 시간.
3. 같은 양의 것을 추가하십시오. 시약 완충액 C그리고 동량의 무수 에탄올, 피펫팅으로 완전히 섞는다.

(예를 들어: 400μl Reagent Buffer IV를 추가하는 경우, 약 430μl 시약 완충액 C와 430μl 무수 에탄올을 추가합니다.. 시약 완충액 C를 추가한 후 약간의 침전이 발생할 수 있습니다., 그러나 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다.)

4. 얻은 액체를 DNA 추출 정제 컬럼에 첨가합니다. (또는 카트리지) (매번 약 650-700μl), 실온에 잠시 놓아두세요 2 분, 8,000rpm 이상 원심분리기 1 분. 수집된 폐기물을 폐기하고 다음 단계를 위해 수집 튜브를 정제 컬럼에 다시 삽입합니다..
5. 단계 반복 4, 남은 액체를 DNA 추출 정제 컬럼에 첨가 (또는 카트리지), 8,000rpm 이상 원심분리기 1 분, 폐기물과 수집 튜브를 폐기.
6. DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (또는 카트리지) 수집 튜브에, 추가하다 300μl 씻다완충기 1, 8,000rpm 이상 원심분리기 1 분. 폐기물을 버리고 다음 단계를 위해 정제 컬럼을 튜브에 다시 삽입하십시오..

(메모: 무수에탄올이 첨가되었는지 확인하세요. 씻다 완충기 1.)

7. 추가하다 500μl 씻다완충기 1 DNA 추출 정제 컬럼으로 (또는 카트리지), 14,000rpm으로 원심분리기 (20000×g) ~을 위한 2 분. 건조기 멤브레인이 필요한 경우 원심분리 시간을 연장하세요..
8. DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (또는 카트리지) 새 원심분리기 튜브에, 뚜껑을 열어라, 65°C에서 배양합니다. 2 분. 잔여 에탄올이 다운스트림 실험에 영향을 미치지 않도록 에탄올을 증발시키는 데 필요한 경우 이 단계를 확장하십시오..
9. 추가를 일시 중지합니다. 50-100μl 용출 완충액 막에, 12,000rpm으로 원심분리기를 2 분.

(메모: 1. DNA 용출을 위해 50μl Elution Buffer를 사용하면 DNA 농도는 증가할 수 있지만 총 DNA 수율은 감소합니다.. 2. 용출된 DNA는 DNA 추출 정제 컬럼에 재적용 가능, 12000rpm으로 원심분리 2 분 다시 DNA 수율을 증가시킵니다.)