C형 간염 바이러스 핵산 분석 키트 (PCR-형광 프로브 방법) 연구 전용

상품명

C형 간염 바이러스 핵산 분석 키트 (PCR-형광 프로브 방법)

포장 사양

48 티

제품소개

• 이 키트는 C 형 간염 바이러스의 시험 관내 정량적 결정에 사용됩니다. (HCV) 핵산 (RNA) 혈청 샘플에서.
• HCV 감염 검사가 필요한 환자와 C 형 간염에 대한 항 바이러스 치료를받는 환자를 대상으로합니다..
• 이 키트는 일반적인 임상 유형의 HCV를 감지 할 수 있습니다, 유형을 포함하여 1 에게 6.
• 그것은 주로 혈액 HCV RNA 함량과 C 형 간염 환자의 변화를 모니터링하여 치료 반응 및 효과를 평가합니다..
• 하지만, 검사는 환자의 상태 평가를 위해서만 의존해서는 안됩니다..
• 포괄적 인 평가, 임상 성능 및 기타 실험실 테스트 지표 결합, 필요합니다.
• 이 키트는 HCV의 혈액 공급원 스크리닝에 사용해서는 안됩니다..
• 키트는 자기 비드를 함유 한 용 해물을 사용하여 혈청 샘플로부터 HCV RNA를 추출하고 동일한 튜브에서 증폭합니다..
• HCV RNA는 역전사 효소에 의해 HCV cDNA로 역전 전사되고 실시간 분석에서 Taqman 프로브 기술을 사용하여 정량화된다..
• 이 키트의 교정 및 품질 관리 제품은 비활성화 된 C 형 간염 바이러스를 함유 한 임상 혈청 샘플입니다..
• 이 키트는 거짓 부정을 피하기 위해 내부 라벨을 감지하여 PCR 억제제 샘플을 모니터링합니다..

제품 세부 사항

목	제품정보	기초	사양 및로드
RLB	핵산 추출 시약	HCV Lysate (자기 구슬 포함)	수산화 나트륨, 염화 칼륨, 트리스 베이스, 및 구조적 자기 구슬
케이블	HCV 린스 솔루션	염화 칼륨, 아세테이트 나트륨	25.0병당 ML
1	PCR 증폭 시약	HCV RT-PCR 반응 용액	프라이머, 프로브, 데 옥시 리보 뉴 클레오 시드 트립 포스페이트, 및 마그네슘 이온
2	HCV 효소 혼합물	M-MLV 역전사 효소, DNA 중합효소	ㅏ 1001
3	구경 측정	HCV 교정 cal (1.0~ 3.0) 10^6 tu/ml	고정 가치 HCV 양성 혈청 샘플 (비활성화)
4	구경 측정	HCV 교정 cal (1.0~ 3.0) 10^2 IU/ml	고정 가치 HCV 양성 혈청 샘플 (비활성화)
5	구경 측정	HCV 교정 cal (1.0~ 3.0) 10^4 IU/ml	고정 가치 HCV 양성 혈청 샘플 (비활성화)
6	구경 측정	HCV 교정 cal (1.0~ 3.0) u/ml	고정 가치 HCV 양성 혈청 샘플 (비활성화)
7	품질 관리 제품	HCV는 강력하게 긍정적 인 품질 관리 제품입니다 (0.5~ 5.0) u/ml	HCV 양성 혼합 혈청 샘플 (이미 비활성화되었습니다)
8	품질 관리 제품	HCV 약한 양성 품질 제어 제품 (100~ 700) IU/ml	HCV 양성 혼합 혈청 샘플 (이미 비활성화되었습니다)
9	품질 관리 제품	HCV 음성 품질 관리 제품	HCV- 음성 혼합 혈청 샘플 (이미 비활성화되었습니다)
10	내부 레이블	HCV 내부 레이블	내부 표준 핵산 템플릿

발언:

ㅏ. 교정기 제품의 매개 변수 (① ~ ④) 강한 긍정적이고 약한 양성 품질 관리 제품에 대한 고정 값은 배치마다 다를 수 있습니다. (지정된 범위 내에서). 자세한 내용은 키트의 첨부 된 페이지를 참조하십시오..

비. 키트의 구성 요소를 다른 배치 번호와 혼합하지 마십시오..

씨. 자체 제공 테스트 품목에는 0.2ml PCR 반응 튜브가 포함됩니다, 원심분리기, 피펫 및 흡입 헤드의 다양한 사양, 자기 프레임, 그리고 회사가 권장하는 자기 프레임.

저장 조건 및 유효성:

1. 핵산 추출 키트: 보관하십시오 2 8 ° C까지.
2. PCR 증폭 키트: 반복 동결 및 해동을 피하기 위해 -20 ° C ± 5 ° C로 저장하십시오. (더 이상 3 타임스).
3. 유효 기간: 이 키트는 유효합니다 12 개월. 유효 기간 내에 사용하십시오. 생산 날짜 및 만료 날짜는 레이블에서 찾을 수 있습니다..
4. 시뮬레이션 된 운송 실험에 따르면 운송 조건은 제품의 안정성과 유효성에 영향을 미치지 않습니다.. 하지만, 운송 시간이 초과해서는 안됩니다 7 날.

적용 가능한 기기:

• SLAN-96P
• MX3000P/3005p
• AB17500 실시간 형광 PCR 기기

샘플 요구 사항:

1. 적용 가능한 샘플 유형: 혈청.
2. 샘플 수집: 멸균 주사기를 사용하여 2-5ml의 정맥 혈액을 수집하여 멸균 건조 튜브에 넣습니다. (바람직하게는 분리 겔로) 실온에서 30 분. 1500g에서 원심 분리하십시오 35 혈청과 세포를 분리하는 데 몇 분. 상청액을 옮깁니다 (적혈구를 피합니다) 저장을위한 DNA 및 RNA 효소가없는 멸균 원심 분리기 튜브로.
3. 저장: 혈청 샘플은 2-8 ° C에서 2 주 이상 저장해서는 안됩니다.. -20 ° C 이하의 장기 저장은 허용됩니다, 그러나 반복적인 냉동과 해동을 피하십시오. 테스트하기 전에 샘플을 실온으로 되돌려야합니다.
4. 운송: 표본은 드라이 아이스 또는 거품 상자로 운반해야합니다., 언, 그리고 봉인.

교정 방법:

(나) 시약 준비 (시약 준비 영역):

1. 다양한 시약 성분을 꺼내서 실온에 도달 할 수 있습니다..
2. 추출물 준비: HCV 용 해물을 완전히 혼합하십시오 (RLB) 사용하기 전에 자기 구슬을 포함합니다. 비율로 혼합하십시오 (HCV Lysate 1501/Human + HCV 내부 표준 1.01/Human). 1501/웰을 PCR 증폭 튜브로 즉시 분배하십시오, 추출물이 튜브 바닥에 있는지 확인. 접착 성벽 추출물과 자기 구슬이있는 경우, 작동 테이블에서 부드럽게 진동하여 튜브 바닥에 도달하도록합니다..
3. PCR 증폭 시약 제제: 샘플의 수에 따라 HCV RT-PCR 반응 액체 및 HCV 효소 혼합물 준비, HCV 음성 품질 관리 제품, HCV 약한 양성 품질 제어 제품, HCV 강력한 양성 품질 제어 제품, 및 HCV 교정 제품. 비율로 혼합하십시오 (38.01 HCV RT-PCR 반응 액체/인간 + HCV 효소 혼합물 2.01/인간), 즉시 사용하기 위해 PCR-Mix에 완전히 혼합하십시오.

(II) 핵산 추출 및 정제 (표본 처리 영역):

1. 추가하다 1001 테스트 할 샘플 또는 HCV, HCV, HCV, 및 HCV 교정. 부드럽게 불고 2 ~ 3 번 섞습니다, 그런 다음 실온에서 서도록하십시오 5 분.
2. PCR 튜브를 자기 프레임으로 옮깁니다 (회사가 추천합니다) 그리고 서 있습니다 3 분. 피펫 또는 부압 장치로 상청액을 배출하십시오., 자기 구슬을 제거하지 않도록주의하십시오.
3. PCR 튜브를 자기 프레임에 보관하십시오, 추가하다 2501 HCV 헹굼 유체 (케이블) 우물에, 서 있습니다 1 분, 그런 다음 피펫 또는 부정 압력 장치로 상청액을 배출하십시오., 잔류 유체가 없음.
4. 단계 반복 3 다른 세척을 위해 RWB와 함께, PCR 튜브의 바닥에 잔류 유체를 남기지 않도록주의.

(III) 확장 시약 첨가 (표본 처리 영역): 준비된 PCR-Mix에 추가하십시오 401 핵산 자기 비드를 함유 한 PCR 튜브에 우물 당. 증폭 튜브를 덮으십시오, 그리고 자기 구슬을 뒤집기 위해 부드럽게 바운스, PCR-Mix가 완전히 혼합되어 있는지 확인하십시오. 수평 및 일시적으로 원심 분리. PCR 반응 튜브를 검출 영역으로 옮기고 검출을 위해 형광 정량적 PCR 기기에 놓습니다..

(IV) PCR 증폭 (테스트 영역):

1. PCR 반응 튜브를 앰플리터에 넣으십시오, HCV 음성 품질 관리를 설정하십시오, HCV 약한 양성 품질 관리, HCV 강력한 양성 품질 관리, HCV 교정 cal ~ ④, 해당 순서에 따라 테스트 할 샘플. 샘플 이름과 보정 된 제품 농도를 설정하십시오.
2. 형광 PCR 증폭 절차를 수행하십시오, 다음과 같이 SLAN-96P 사용 (MX3000P/3005P 및 ABI7500P는 유사합니다).

단계	온도 (℃)	시간	반복 번호
역전사	45	15 분	1
사전 도포	95	5 분	–
변성	94	15 초	50
가열 냉각, 연장, 및 형광 획득	58	45 초	(형광 수집)
채널 선택	–	–	–

결과 획득:

1. 증폭 곡선 설명: 일반적으로, 증폭 곡선은 S- 타입 패턴을 나타낸다.
2. 기준선 설정: 기준으로 안정적인 형광 배경 영역을 선택하십시오.
3. 임계 값 설정: 음성 품질 관리 제품의 증폭 곡선의 가장 높은 지점을 능가해야합니다..
4. 결과 분석: 기준선 및 임계 값 라인을 설정 한 후, 결과를 분석하십시오. 샘플 및 품질 관리 제품 테스트 결과에 대한 FAM 채널 선택; 필요에 따라 Hex 또는 Vic 채널을 사용하십시오. (특정 설정은 계측기 작동 지침을 참조하십시오).

참조 가치:

• 더 낮은 감지 한계는 다음과 같습니다 15 IU/ml, 정량화 한계입니다 50 IU/ml, 대상 CT 값이 있습니다 40, 및 내부 표준 CT 40.

실험 효과 판단:

1. 모든 교정 제품은 ≥0.980의 양의 선형 상관 계수를 나타냅니다..
2. 음성 품질 관리 제품은 감지하지 않아야합니다, 내부 표준 CT 값이 있습니다 40.
3. 강한 양성 품질 관리의 CT 가치는 <32, 범위 (0.5 에게 5.0) x 10^4 IU/ml; 약하게 긍정적 인 QC CT 값이 있어야합니다 <37, 정량화 결과는 범위입니다 (100 에게 700) IU/ml.
4. 이러한 요구 사항은 동일한 실험 내에서 충족되어야합니다; 그렇지 않으면, 결과는 유효하지 않은 것으로 간주되며 다시 테스트가 필요합니다.

테스트 결과의 해석:

1. 50 ~ 1.010^8 IU/ml 사이의 샘플 테스트 결과, S 형 곡선으로, 샘플 CT 값 40, 및 내부 표준 CT 값 40, 결과는 유효하며 해당 농도 값에 따라 양수로 직접보고 될 수 있습니다..
2. 샘플 테스트 결과가 1.010^8 IU/ml를 초과하는 경우, 샘플을 희석하고 다시 테스트하십시오.
3. 샘플 테스트 결과가있는 경우 <50 IU/ML HCV RNA, 샘플 CT 값 40 및 내부 표준 CT 값 40, 바이러스 부하는 낮습니다, 결과는 직접보고 할 수 있습니다, 농도는 참조 용입니다.
4. 샘플 테스트 결과가있는 경우 <15 IU/ML HCV RNA, 샘플 CT 값 40 및 내부 표준 CT 값 40, 보고 된 농도는 키트의 하한보다 낮습니다; 내부 표준이 비정상적이거나 누락 된 경우, 결과는 유효하지 않으며 조사 및 재 테스트가 필요합니다.

탐지 방법의 한계:

• 임상 진단 및 치료는 환자 증상을 고려해야합니다, 병력, 그리고 다른 테스트.
• 잘못된 샘플 처리는 부정확 한 결과를 얻을 수 있습니다.
• 다른 샘플 유형은 사용하기 전에 검증이 필요합니다.
• HCV RNA 정량화는 몇 가지 요인에 의존합니다.
• 감지 키트는 특정 PCR 기기에 최적화되어 있습니다.

제품 성능 지표:

• 준수율로 국가 표준 자료에 대해 테스트 100%.
• 정량화 한계입니다 50 IU/ml, 최소 감지 한계 15 IU/ml.
• 정밀도는 변동 계수 ≤5%로 평가됩니다..
• 선형 범위입니다 50 1.010^8 IU/ml, 선형 상관 계수가 ≥0.980입니다.
• HCV 유형을 감지합니다 1 에게 6.
• 교차 반응성이없는 특이성이나 일반적인 물질의 간섭을 보여줍니다.
• 비교 연구는 신뢰성을 보여 주었다.

주목:

• 이 키트는 시험 관내 테스트를위한 것입니다. 사용하기 전에 설명서를 검토하십시오.
• 바이러스로 인한 적절한 취급을 확인하십시오 RNA 추출 및 PCR 증폭 관여.
• 확립 된 안전 프로토콜을 따르십시오.
• 보관 조건: 핵산 추출 키트에 저장된 2 8 ° C까지; -20 ℃ ± 5 ℃에서 저장된 PCR 증폭 키트.
• 타당성 기간입니다 12 개월; 생산 및 만료 날짜를 확인하십시오.
• 운송 조건이 초과해서는 안됩니다 7 날.
• 적용 가능한 샘플 유형은 혈청입니다; 샘플을 세 심하게 수집하고 처리합니다.
• 샘플은 장기간 보관하거나 반복적 인 동결/해동에 적용해서는 안됩니다..
• 냉각 방법을 사용한 적절한 운송이 필수적입니다.
• 시약 준비에는 컴포넌트 균형을 실온과 균형있게 조정하고 사용하기 전에 HCV Lysate를 혼합하는 것이 포함됩니다..
• PCR 증폭 시약 준비는 샘플 수량에 따라 수행되어야합니다..
• 핵산 추출은 샘플을 신중하게 첨가하고 자기 프레임의 사용을 포함합니다..
• 시약 첨가 및 PCR 증폭 확장 정확한 단계를 따라야합니다..
• 형광 PCR 증폭 절차는 기기 별 프로토콜을 준수해야합니다.
• 결과와 해석의 교정은 세 심하게 수행되어야합니다.
• 테스트 제한, 결과에 영향을 미치는 잠재적 돌연변이를 포함합니다, 고려해야합니다.
• 정확한 테스트를 위해 제품 성능 지표 및 예방 조치를 면밀히 따라야합니다..
• 지속적인 품질 관리 및 안전 프로토콜 준수는 신뢰할 수있는 결과의 가장 중요합니다..