Tissue DNA/RNA Extraction Kit

1. 試薬キットのコンポーネント

仕様	50T	100T
猫. いいえ.	SN0329	SN0330
DNAクリーンアップカラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
RNA抽出カラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
RNA抽出 バッファI	30 ミリリットル	2×30 ミリリットル
RNA Extraction Buffer IV	30 ミリリットル	2×30 ミリリットル
阻害剤除去バッファー	2×30 ミリリットル	4×30 ミリリットル
洗浄バッファー 1	2×15 ミリリットル	3×15 ミリリットル
溶出バッファー	20 ミリリットル	20 ミリリットル
プロテイナーゼK	1ミリリットル	2x1ml
取扱説明書	1	1

 

2. ストレージ

この試薬キットは、室温で保管する必要があります (15-25℃) 乾燥状態で、安定しています 12 月. Proteinase K contains a stabilizer, allowing it to be transported at room temperature; しかし, for long-term storage, -20℃に保持する必要があります.

3. 試薬キットを使用するための指示

3.1 このキットは分子生物学の研究目的を目的としており、疾患の診断や治療に使用すべきではありません.

3.2 キットの一部のコンポーネントには刺激物が含まれています; 必要な予防策を講じることをお勧めします (保護服やゴーグルを着用するなど).

3.3 このキットを使用するには、高速遠心分離機などの追加の機器が必要です, 水浴 (メタルバス), 渦ミキサー, 無水エタノール, 液体窒素, クロロホルム, 滅菌脱イオン水, およびEPチューブ.

4. 試薬キットの紹介

The sample DNA/RNA simultaneous isolation and purification kit provide a fast and efficient purification solution for tissue sample DNA/RNA. This kit offers two sets of lysis systems, suitable for various sample tissues and cells, including most plants, 動物, 細菌, 等.

The DNA/RNA rapid purification kit can extract total DNA/RNA from samples within 1 時間. The extracted DNA/RNA can be directly used for RT-PCR, ノーザンブロット, 等. 精製プロセス全体では、フェノールクロロホルムなどの有毒試薬は必要ありません.

5. 実験原則と手順

6. 抽出プロセス

実験を開始する前の注意事項:

あ. 使用する前, add the specified amount of absolute ethanol to ウォッシュバッファ 1 試薬ボトルのラベルによると, and mark a check on the label to indicate the addition of absolute ethanol.

B. 溶出バッファーはaです 0.1X TEソリューション 最小限のEDTAで. EDTAがその後の実験に影響を与える場合, it is recommended to use sterile deionized water as a substitute for the elution buffer.

C. RNA Extraction Buffer I is designed for the extraction of plant and fungal samples, while RNA Extraction Buffer IV is primarily used for animal tissues, 血, and other sample tissues.

1. サンプル処理:
2. Plant/animal tissue materials: Collect samples using liquid nitrogen, grind the collected material directly in liquid nitrogen, and proceed to step 2 (recommended to use RNA Extraction Buffer I).
3. Cell tissues: Centrifuge and collect <107 suspended cells in a 1.5 ML遠心チューブ, quickly proceed to step 2 (recommended to use RNA Extraction Buffer III).
4. 追加 500μl RNA Extraction Buffer I/RNA Extraction Buffer IV, 10μl Proteinase K, vortex and mix thoroughly. Ensure gentle mixing in this step to prevent mechanical cutting of tissue DNA and reduce DNA yield.
5. Transfer the lysate to a DNA精製 カラム, で遠心分離する 13,000 の回転数 2 分, ろ液を集めます (RNAは濾液に存在します). この時点で, DNA is adsorbed on the DNA column and can be briefly stored at 4°C while simultaneously collecting RNA in the next steps.

(注記: If the sample is plant tissue, で遠心分離する 13,000 の回転数 10 分, and add the supernatant to the DNA binding column.)

4. Precisely estimate the volume of the filtrate, 追加 5 times thevolume of absolute ethanol, 十分に混ぜる. 降水が発生した場合, 後続の実験には影響しません.
5. Add the obtained liquid to the RNA extraction purification column (毎回約650〜700μl), オーバーでの遠心 8,000 の回転数 1 分, discard the collected waste liquid, 次のステップのために、コレクションチューブを精製列に再挿入します.
6. ステップを繰り返します 5, add the remaining liquid to the RNA extraction purification column, オーバーでの遠心 8,000 の回転数 1 分, discard the waste liquid and collection tube, place the RNA extraction purification column in a new collection tube, and prepare for simultaneous collection of DNA.
7. 追加 600μl Inhibitor Removal Buffer to the DNA extraction purification column and RNA extraction purification column, オーバーでの遠心 8,000 の回転数 1 分, discard the waste liquid, and reinsert the DNA/RNA purification column into the collection tube for the next step.
8. 追加 700μl Wash Buffer 1 to the DNA extraction purification column and RNA extraction purification column, で遠心分離する 14,000 RPM (20,000×g) のために 2 分. Extend centrifugation time appropriately to ensure the membrane is thoroughly dried.

(注記: Confirm that absolute ethanol has been added to Wash Buffer 1. The presence of ethanol has a significant impact on subsequent experiments, so membrane drying is crucial. 遠心分離後, 溶出前にエタノールが存在しないことを確認してください, then discard the waste liquid and collection tube.

洗浄バッファーで洗浄した後 1, the membrane of the RNA purification column should only have a slight color. 遠心分離後, RNA精製カラムを慎重に取り外します, ensuring no contact with the collection tube to avoid ethanol interference.)

9. Place the DNA/RNA purification column into a new centrifuge tube, drip 50-100 μl Elution Buffer onto the membrane, 室温でインキュベートします 5 分 (15°C-25°C), オーバーでの遠心 8,000 の回転数 1 分.

(注記: Eluting nucleic acids with 50 μl Elution Buffer can increase the nucleic acid concentration but decrease the total nucleic acid yield.)

• 注記:

1. 一般的に, larger elution volumes result in higher elution efficiency, but to increase nucleic acid concentration, the elution volume can be reduced, but not below 50 μl.
2. RNA, in the presence of RNA Extraction Buffer I/RNA Extraction Buffer III, is not degraded by RNAse but should be distinguished from DNA in subsequent experiments. Use RNAse-free consumables for RNA separation whenever possible.