Super-Pure RNA Extraction Kit (TRIzol)

1. 試薬キットのコンポーネント

仕様	50T	100T
猫. いいえ.	SN0303	SN0304
RNA抽出カラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
DNase I	1ミリリットル	1ミリリットル
10 × Reaction Buffer	1 ミリリットル	2 ×1ml
Trizol Buffer	50 ミリリットル	2 × 50 ミリリットル
阻害剤除去バッファー	30 ミリリットル	2 × 30 ミリリットル
洗浄バッファー 1	15 ミリリットル	2 × 15 ミリリットル
溶出バッファー	20 ミリリットル	2 ×20 ml
取扱説明書	1	1

 

2. ストレージ

この試薬キットは、室温で保管する必要があります (15-25℃) 乾燥した環境では安定しています 12 月. DNase I contains a preservative, allowing transportation at room temperature, しかし、長期保管の場合, -20℃に保持する必要があります.

3. 試薬キットを使用するための指示

3.1 このキットは分子生物学の研究目的を目的としており、疾患の診断や治療に使用すべきではありません.

3.2 キットの一部のコンポーネントには刺激物が含まれています; 必要な予防策を講じることをお勧めします (保護服やゴーグルを着用するなど).

3.3 このキットを使用するには、高速遠心分離機などの追加の機器が必要です, 水浴 (メタルバス), 渦ミキサー, 無水エタノール, 液体窒素, クロロホルム, 滅菌脱イオン水, およびEPチューブ.

4. 試薬キットの紹介

This RNA purification kit utilizes the traditional TRIzol combined with column membrane method for the rapid purification of plant, animal, 組織, 細胞, microbial RNA, and fungal hyphae RNA. It is suitable for most species. This RNA purification kit can be applied to plant tissues exceeding 100 mg. The RNA extracted with this kit has extremely low DNA content. If sensitivity to DNA in experiments is a concern, it is recommended to use DNase I digestion on the column.

The RNA Fast Purification Kit can extract total RNA from samples (核RNAおよび細胞質RNAを含む) 内で 1 時間. 抽出されたRNAは、RTに直接使用できます-PCR, ノーザンブロット, その他のアプリケーション.

5. 実験原則と手順

6. 抽出プロセス

実験を開始する前の注意事項:

あ. ご使用の前に, add the specified amount of absolute ethanol to ウォッシュバッファ 1 試薬ボトルのラベルによると, and check the box on the label to indicate that absolute ethanol has been added.

B. 溶出バッファーはaです 0.1X TEソリューション 最小限のEDTAを含む. EDTAがその後の実験に影響を与える場合, it is recommended to replace the Elution Buffer with sterile deionized water.

1. サンプル処理:

あ. 組織: If fresh materials cannot be used immediately, place them in liquid nitrogen and store them at -80°C. 乾燥材料は室温で保管できます. Grind 30~80 mg of tissue in liquid nitrogen and add 1 ml Trizol buffer for homogenization.

B. Monolayer Cultured Cells: Aspirate the culture medium and add 1 ml Trizol buffer for homogenization.

C. Cell Suspension: Centrifuge to collect cells and add 1 ml Trizol buffer for homogenization.

2. After adding Trizol buffer to the sample, mix thoroughly by pipetting, allow complete sample lysis, and incubate at room temperature for 5 分.

3. Add chloroform in a ratio of 200 μl per 1 ml of Trizol buffer, vigorously shake for 30 秒, and incubate at room temperature for 2 分.

4. Centrifuge the lysate at 4°C, 12,000 の回転数 10 分. RNA will be present in the upper aqueous phase.

5. 上清を新しい遠心管に慎重に移します, avoiding the collection of the middle and bottom layers. (注記: 約 400 μLの液体を伝達できます, which may be less for some species.)

6. Add an equal volume of pre-chilled absolute ethanol, mix quickly. (例えば, 追加 400 lysateのμl, 追加 400 絶対エタノールのμL. 溶解物の体積が少ない場合 400 μl, reduce the amount of absolute ethanol proportionally. A slight precipitate may form after adding ethanol, but it does not affect subsequent experiments.)

7. Transfer the obtained liquid to an RNA purification column (約 650-700 μl per time), centrifuge at more than 8,000 の回転数 1 分, 収集された廃棄物を廃棄します, 次のステップのために、コレクションチューブを精製列に再挿入します.

8. ステップを繰り返します 7, adding the remaining liquid to the RNA purification column, centrifuge at more than 8,000 の回転数 1 分, discard the waste and the collection tube.

9. Place the RNA purification column in a new collection tube, 追加 300 μLの阻害剤除去バッファー, centrifuge at more than 8,000 の回転数 1 分, 廃棄物を捨てます, and reinsert the RNA purification column into the tube for the next step.

10. 追加 80 μl of DNase Iworking solution to the RNA purification column, incubate at 20°C to 30°C for 15 分. (Prepare DNase I working solution: 62 μl RNase-Free Water, 8 μl 10× Reaction Buffer, そして 10 μl DNase I, make up to 80 μl DNase I working solution.)

11. 追加 300 μLの阻害剤除去バッファーRNA精製カラムに, centrifuge at more than 8,000 の回転数 1 分, 廃棄物を捨てます, and reinsert the RNA purification column into the tube for the next step.

12. 追加 700 洗浄バッファーμl 1RNA精製カラムに, で遠心分離する 14,000 RPM (20,000×g) のために 2 分, extend the centrifugation time if needed for a drier membrane. (注記: Confirm the addition of ethanol to Wash Buffer 1; ethanol presence significantly affects subsequent experiments. Ensure the membrane is dry after centrifugation before elution. 廃棄物とコレクションチューブを捨てます. After using Wash Buffer 1, RNA精製カラムの膜はわずかな色のみを持つ必要があります. Carefully remove the RNA purification column after centrifugation, ensuring it does not touch the collection tube to avoid ethanol contamination.)

13. Place the RNA purification column in a new centrifuge tube, drip 100 μLの溶出緩衝液膜に, 室温でインキュベートします 5 分 (15°C to 25°C), and centrifuge at more than 8,000 の回転数 1 分. (注記: RNAを溶出します 50 μl of Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)

14. 前のステップを繰り返します. (注記: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted the second time or continue using the original collection tube to collect RNA.)