超高純度RNA抽出キット (トリゾール)

1. 試薬キットのコンポーネント

仕様	50T	100T
猫. いいえ.	SN0303	SN0304
RNA抽出カラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
DNase I	1ミリリットル	1ミリリットル
10 × 反応バッファー	1 ミリリットル	2 ×1ml
トリゾールバッファー	50 ミリリットル	2 × 50 ミリリットル
阻害剤除去バッファー	30 ミリリットル	2 × 30 ミリリットル
洗浄バッファー 1	15 ミリリットル	2 × 15 ミリリットル
溶出バッファー	20 ミリリットル	2 ×20ml
取扱説明書	1	1

 

2. ストレージ

この試薬キットは、室温で保管する必要があります (15-25℃) 乾燥した環境では安定しています 12 月. DNase Iには防腐剤が含まれています, 室温での輸送が可能, しかし、長期保管の場合, -20℃に保持する必要があります.

3. 試薬キットを使用するための指示

3.1 このキットは分子生物学の研究目的を目的としており、疾患の診断や治療に使用すべきではありません.

3.2 キットの一部のコンポーネントには刺激物が含まれています; 必要な予防策を講じることをお勧めします (保護服やゴーグルを着用するなど).

3.3 このキットを使用するには、高速遠心分離機などの追加の機器が必要です, 水浴 (メタルバス), 渦ミキサー, 無水エタノール, 液体窒素, クロロホルム, 滅菌脱イオン水, およびEPチューブ.

4. 試薬キットの紹介

この RNA 精製キットは、植物の迅速な精製のためにカラム膜法と組み合わせた伝統的な TRIzol を利用しています。, 動物, 組織, 細胞, 微生物のRNA, および真菌の菌糸RNA. ほとんどの種に適しています. この RNA 精製キットは、以下の植物組織に適用できます。 100 mg. このキットで抽出された RNA は DNA 含有量が非常に低いです. 実験における DNA への感受性が懸念される場合, カラムでは DNase I 消化を使用することをお勧めします。.

RNA Fast Purification Kit はサンプルからトータル RNA を抽出できます (核RNAおよび細胞質RNAを含む) 内で 1 時間. 抽出されたRNAは、RTに直接使用できます-PCR, ノーザンブロット, その他のアプリケーション.

5. 実験原則と手順

6. 抽出プロセス

実験を開始する前の注意事項:

あ. ご使用の前に, 指定量の無水エタノールを加えます ウォッシュバッファ 1 試薬ボトルのラベルによると, ラベルのボックスをチェックして、絶対エタノールが追加されたことを示してください.

B. 溶出バッファーはaです 0.1X TEソリューション 最小限のEDTAを含む. EDTAがその後の実験に影響を与える場合, 溶出緩衝液を滅菌脱イオン水に置き換えることをお勧めします.

1. サンプル処理:

あ. 組織: 新鮮な材料をすぐに使用できない場合, それらを液体窒素に入れ、-80°Cで保管してください. 乾燥材料は室温で保管できます. 液体窒素中の30〜80 mgの組織を粉砕し、追加 1 ML Trizolバッファー 均質化用.

B. 単層培養細胞: 培地を吸引し、追加します 1 ML Trizolバッファー 均質化用.

C. 細胞懸濁液: セルを収集して追加する遠心 1 ML Trizolバッファー 均質化用.

2. 追加した後 Trizolバッファー サンプルに, ピペットで完全に混ぜます, 完全なサンプル溶解を許可します, 室温でインキュベートします 5 分.

3. クロロホルムをの比率に追加します 200 μLあたり 1 MLのTrizolバッファー, 激しく振る 30 秒, 室温でインキュベートします 2 分.

4. 溶解物を4°Cで遠心します, 12,000 の回転数 10 分. RNAは上部水相に存在します.

5. 上清を新しい遠心管に慎重に移します, 中層と下層のコレクションを避けます. (注記: 約 400 μLの液体を伝達できます, 一部の種ではそれほど少ないかもしれません.)

6. 事前に縮小した絶対エタノールの等量を追加します, すぐに混ぜます. (例えば, 追加 400 lysateのμl, 追加 400 絶対エタノールのμL. 溶解物の体積が少ない場合 400 μl, 絶対エタノールの量を比例して減らします. エタノールを添加した後、わずかな沈殿物が形成される可能性があります, しかし、それは後続の実験に影響しません.)

7. 得られた液体をRNA精製カラムに移します (約 650-700 時間あたりμL), 以上で遠心分離します 8,000 の回転数 1 分, 収集された廃棄物を廃棄します, 次のステップのために、コレクションチューブを精製列に再挿入します.

8. ステップを繰り返します 7, RNA精製カラムに残りの液体を追加します, 以上で遠心分離します 8,000 の回転数 1 分, 廃棄物とコレクションチューブを捨てます.

9. RNA精製列を新しいコレクションチューブに置きます, 追加 300 μLの阻害剤除去バッファー, 以上で遠心分離します 8,000 の回転数 1 分, 廃棄物を捨てます, 次のステップのために、RNA精製カラムをチューブに再挿入します.

10. 追加 80 dNase IのμLRNA精製カラムの作業ソリューション, 20°Cから30°Cでインキュベートします 15 分. (DNase I Work Solutionを準備します: 62 μLRNaseフリーの水, 8 μL10×反応バッファー, そして 10 μlDNaseI, メイクアップ 80 μLDNaseIワーキングソリューション.)

11. 追加 300 μLの阻害剤除去バッファーRNA精製カラムに, 以上で遠心分離します 8,000 の回転数 1 分, 廃棄物を捨てます, 次のステップのために、RNA精製カラムをチューブに再挿入します.

12. 追加 700 洗浄バッファーμl 1RNA精製カラムに, で遠心分離する 14,000 RPM (20,000×g) のために 2 分, 乾燥膜に必要に応じて遠心分離時間を延長する. (注記: エタノールの添加を洗浄することを確認してください 1; エタノールの存在は、その後の実験に大きく影響します. 溶出前に遠心分離後に膜が乾燥していることを確認してください. 廃棄物とコレクションチューブを捨てます. 洗浄バッファーを使用した後 1, RNA精製カラムの膜はわずかな色のみを持つ必要があります. 遠心分離後にRNA精製カラムを慎重に除去します, エタノール汚染を避けるために、コレクションチューブに触れないようにしてください.)

13. RNA精製カラムを新しい遠心チューブに置きます, 滴下 100 μLの溶出緩衝液膜に, 室温でインキュベートします 5 分 (15°C〜25°C), そして、それ以上で遠心分離します 8,000 の回転数 1 分. (注記: RNAを溶出します 50 μLの溶出バッファーはRNA濃度を増加させる可能性がありますが、RNAの総収量を減少させる可能性があります.)

14. 前のステップを繰り返します. (注記: 新しい遠心チューブを使用してRNAを2回溶出するか、元の収集チューブを使用してRNAを収集し続けることができます.)