Stool Total RNA Extraction Kit

1. 試薬キットのコンポーネント

仕様	50T	100T
猫. いいえ.	SN0341	SN0342
RNA抽出カラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
Humic Acid Removal Reagent I	50ミリリットル	2x50ml
Reagent Buffer C Plus	30 ミリリットル	2x30ml
阻害剤除去バッファー	30ミリリットル	2x30ml
Lysozyme	1ミリリットル	2x1ml
プロテイナーゼK	1ミリリットル	2x1ml
洗浄バッファー 1	15 ミリリットル	2 × 15 ミリリットル
溶出バッファー	20 ミリリットル	20 ミリリットル
取扱説明書	1	1

2. ストレージ

この試薬キットは、室温で保管する必要があります (15-25℃) under dry conditions and can be kept for 12 月. Lysozyme and Proteinase K contain preservatives, allowing for transportation at room temperature. 長期保管用, it should be stored at -20°C.

3. 試薬キットを使用するための指示

3.1 このキットは分子生物学の研究目的を目的としており、疾患の診断や治療に使用すべきではありません.

3.2 キットの一部のコンポーネントには刺激物が含まれています; 必要な予防策を講じることをお勧めします (保護服やゴーグルを着用するなど).

3.3 このキットを使用するには、高速遠心分離機などの追加の機器が必要です, 水浴 (メタルバス), 渦ミキサー, 無水エタノール, 液体窒素, クロロホルム, 滅菌脱イオン水, およびEPチューブ.

4. 試薬キットの紹介

The Fecal Total RNA Purification Kit provides a fast and efficient method for purifying total RNA from feces and vomit, widely applicable to the extraction of Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, and viral RNA in feces and vomit samples.

This kit effectively removes impurities and inhibitors from feces and vomit, reducing inhibition in subsequent downstream experiments such as PCR. The extracted RNA can be directly used for PCR, サザンブロット, 等. 精製プロセス全体では、フェノールクロロホルムなどの有毒試薬は必要ありません, making the RNA purification kit suitable for various other sample types.

5. 実験原則と手順

6. 抽出プロセス

実験を開始する前の注意事項:

あ. 使用する前, 指定された量の無水エタノールを追加します ウォッシュバッファ 1 as indicated on the reagent bottle label, and mark with a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.

B. 溶出バッファーはaです 0.1X TEソリューション 最小限のEDTAを含む. EDTAが後続の実験に影響を与える可能性がある場合, it is recommended to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.

1. サンプル処理 (Inhibitor Removal):

あ: Add approximately 200mg of samples such as feces, add 1ml of Humic Acid Removal Reagent I, vortex thoroughly for 1-2 分, で遠心分離する 12,000 の回転数 2 分, and discard the supernatant.

B: If the extracted sample is a virus sample, you can proceed directly to step 2. If the sample contains a high amount of inhibitors, it is recommended to perform the inhibitor removal step first, although it may reduce the yield of viral nucleic acid.

2. サンプル溶解:

あ: For extracting nucleic acids from bacterial samples, 追加 560μl of Buffer C Plus, 20μl Proteinase K, and 20μl Lysozyme to the centrifuge tube from the previous step. 徹底的に反転して混ぜます, digest at 85℃ for 5 分, inverting the tube 6-7 times during digestion.

B: For extracting nucleic acids from virus samples, 追加 560μl of Buffer C Plus and 20μl Proteinase K. Digest at 85℃ for 5 分, inverting the tube 6-7 times during digestion.

3. で遠心分離します。 12,000 の回転数 5 分, transfer the supernatant to a new centrifuge tube (approximately 500μl liquid transferred).
4. Add an equal volume of anhydrous ethanol, 十分に混ぜる. Precipitation may occur, but it does not affect subsequent experiments.
5. Transfer the obtained liquid to an RNA purification column (毎回約650〜700μl), 室温でインキュベートします 2 分, オーバーでの遠心 8,000 の回転数 1 分, 収集された廃棄物を廃棄します, 次のステップのために、コレクションチューブを精製列に再挿入します.
6. Place the RNA purification column into a new collection tube, 追加 400μLの阻害剤除去バッファー, オーバーでの遠心 8,000 の回転数 1 分, 廃棄物を捨てます, and place the nucleic acid purification column back into the tube for the next step.
7. 追加 500洗浄バッファーμl 1RNA精製カラムに, で遠心分離する 14,000 RPM (20,00×g) のために 2 分, extending the centrifugation time as needed to ensure membrane drying.

(注記: エタノールの存在は、その後の実験に深刻な影響を及ぼします, so membrane drying is crucial. 遠心分離後, 溶出前にエタノールが存在しないことを確認してください, 次に、廃棄物と収集チューブを廃棄します.)

8. RNA精製柱を新しい遠心分離機に配置します, 追加 30μl – 50 μLの溶出緩衝液膜に, 室温でインキュベートします 5 分 (15℃-25℃), オーバーでの遠心 8,000 の回転数 1 分.

(注記: Using 30μl of Elution Buffer to elute RNA can increase RNA concentration but may reduce total RNA yield.)

9. 前のステップを繰り返します.

(注記: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted in the second wash or continue using the original collection tube to collect RNA.)