テトラメチルホダミンエチルエステル (TMRE) 生細胞のミトコンドリア膜電位の視覚化と定量化に使用される蛍光色素です. それはローダミン染料のファミリーに属し、ミトコンドリアの健康と機能を研究するためにさまざまな細胞アッセイでしばしば使用されます. TMREはアクティブに蓄積します, 偏光ミトコンドリア, 赤い蛍光を発します, ミトコンドリア膜の潜在的な変化を評価するための貴重なツールになります.
TMREの主要な機能:
- 膜電位インジケーター:
- TMREは、ミトコンドリア膜電位の変化に敏感です. アクティブに蓄積します, 偏光ミトコンドリア, 赤い蛍光を発します.
- 細胞透過性:
- TMREは細胞透過性であり、ライブセルイメージング実験で使用できます.
TMREの使用方法:
- TMREストックソリューションの準備:
- 適切な溶媒に溶解することにより、TMREのストックソリューションを準備する (一般的にDMSO) 望ましい濃度を達成するため. 典型的な作業濃度はからです 10 に 200 nm.
- 細胞調製:
- 適切な成長の媒体と状態に関心のある培養細胞. 細胞が付着しているか、イメージングのために簡単に懸濁できることを確認してください.
- TMREのロード:
- 目的の濃度で細胞培養培地またはバッファーにTMREストックソリューションを追加する. 特定の期間、TMREで細胞をインキュベートします, 通常 15-30 分, 染料がミトコンドリアに蓄積するようにします.
- 洗浄 (必要に応じて):
- インキュベーション期間後, 培地から余分なTMREを除去するためにバッファーで細胞を洗浄します.
- 顕微鏡とイメージング:
- 赤い蛍光に適したフィルターセットを備えた蛍光顕微鏡を使用してライブセルイメージングを実行する. 周囲でTMREを励起します 550-580 NMおよび放出された蛍光を約で検出します 590-620 nm.
- ミトコンドリアの健康評価:
- ミトコンドリアのTMREの蛍光強度を分析します. より高い蛍光は、活性および偏光ミトコンドリアを示します, 一方、減少はミトコンドリア膜脱分極を示唆する可能性があります.
- コントロールとキャリブレーション:
- 適切なコントロールを含めます, ミトコンドリアの脱カップラーや脱分極剤で治療された細胞など, 応答を調整し、結果を検証します.
- 定量化:
- 画像分析ソフトウェアを使用して、TMRE蛍光強度を定量化します. これは、シングルセルレベルまたは視野全体で実行できます.
- データ解釈:
- 実験目標のコンテキストで結果を解釈する. TMRE蛍光の変化は、ミトコンドリア機能に関する洞察を提供できます, 健康, さまざまな刺激に対する反応.
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