ソーラーバイオ スーパーオキシド ジスムターゼ (SOD) 活性アッセイキット

スーパーオキシドジスムターゼ (SOD) 活性アッセイキット

注記: 予測する必要がある 2-3 正式な決定前の大きな差異のサンプル.

操作装置: 分光光度計

カタログ番号: BC0170

サイズ: 50T/24S

コンポーネント:

抽出試薬: 60 mL×1. 4℃で保存.

試薬Ⅰ: 15 mL×1. 4℃で保存.

試薬Ⅱ: 160 μL×1. 4℃で保存. 遠心分離後のピペッティングで混合します.

試薬Ⅲ: 11 mL×1. 4℃で保存.

試薬Ⅳ: パウダー×1. 4℃で保存.

試薬V: 2 mL×1. 4℃で保存. 試薬を使用する前に試薬vに追加し、発振器で揺れて完全に混ぜます. 保存できます 3 月.

製品説明:

スーパーオキシドジスムターゼ (SOD, EC 1.15.1.1) 動物に広く見られる, 植物, 微生物と培養細胞. スーパーオキシド陰イオンを触媒してH2O2とO2を形成します. SODは、スーパーオキシドアニオンの除去酵素だけではありません, しかし、主要なH2O2産生酵素でもあります, 生物学的抗酸化システムで重要な役割を果たす.

スーパーオキシドアニオン (O2-) キサンチンおよびキサンチンオキシダーゼ反応系によって生成されます. O2- 青いテトラゾールを減らして青いホルマザンを作成できます, 吸収性があります 560 nm. 芝はO2を除去できます- メチオニンの形成を阻害します. 反応溶液の青い色が暗いほど, SODの活動が低いほど. 反応溶液の青色の色, SODの活性が高いほど.

必要だが提供されていない試薬と装置:

分光光度計, 卓上遠心分離機, 移送ピペット, 1 mLガラスキュベット, モルタル/ホモジナイザー, 氷と蒸留水.

操作手順:

私. サンプルの準備:

1. 細菌とか細胞とか: 細菌または細胞を遠心分離機に収集します, 遠心分離後に上清を捨てます. 細菌または細胞の割合によると (104 細胞): 抽出液の量 (mL) の 1:5-10 抽出する. それは提案されています 5 1mlの抽出試薬を含む数百万の細菌または細胞. 細菌または細胞を超音波処理で分割します (氷の上に置かれた, 超音波パワー200Wまたは 20%, 作業時間3秒, 間隔10秒, 繰り返します 30 回). で遠心分離します。 8000 ×gの場合 10 4℃で3分間不溶物を除去, 試験前に上清を氷上に置きます.
2. 組織: 組織重量の割合に応じて (g): 抽出液の量 (mL) の 1:5-10 抽出する. それは提案されています 0.1 組織のg 1 MLの抽出試薬と氷上で完全に均質化されています.
3. で遠心分離します。, 8000 ×gの場合 10 4℃で3分間不溶物を除去, 試験前に上清を氷上に置きます.
4. 血清 (プラズマ) サンプル: サンプルを直接検出します.

Ⅱ. 決定 手順:

1. 分光光度計を予熱します。 30 分, 波長を調整して 560 nm を測定し、蒸留水でゼロに設定します.
2. 試薬を維持してください, 試薬Ⅲ, 水浴中の試薬v以上 5 37℃で3分(哺乳類) または

25℃ (他の種).

3. 次のリストを使用して試薬を追加します:

試薬 (μL)	試験管 (T)	コントロールチューブ (C)	ブランクチューブ (B1)	ブランクチューブ (B2)
サンプル	90	90	–	–
試薬Ⅰ	240	240	240	240
試薬Ⅱ	6	–	6	–
試薬Ⅲ	180	180	180	180
蒸留水	480	486	570	576
試薬V	30	30	30	30

完全に混合すると、混合物が室温でインキュベートされます 30 分. 混合物を1mlのガラスキュベットに加えます, 各チューブの吸光度値を検出します 560 nm. Δat= at-ac，ΔAB= AB1-AB2. 下部に降水量がある場合, 徹底的に混ぜてから測定します.

Ⅲ. 計算:

1. 阻害率:

阻害率=[ΔAB-ΔAT]÷ΔAB× 100%

阻害率は30％〜70％でなければなりません (に近い値 50% より正確な結果が得られます). 計算された阻害率がより少ない場合 30% またはそれ以上 70%, 通常、サンプルの追加量を調整して決定する必要があります. 阻害の割合が高すぎる場合, サンプルは適切に希釈する必要があります. 阻害の割合が低すぎる場合, サンプルは、より高い濃度で再施行する必要があります.

2. 単位の定義: 酵素活性の1つの単位は、酵素の量として定義されます。 50% 上記のキサンチンの反応系で
3. 計算

あ. 血清 (プラズマ)サンプル

SOD (U/mL)=[p÷(1-p)×VRV]÷vs×f = 11.4×p÷(1-p)×f

B. 組織, 細菌または培養細胞

ある) タンパク質濃度:

SOD (U/ML PROT) = [p÷(1-p)×VRV]÷(VS×CPR)×f = 11.4×p÷(1-p)÷cpr×f

b) サンプル重量

SOD (U/g重量) = [p÷(1-p)×VRV]÷(W×Vs÷Vsv)×f = 11.4×p÷(1-p)÷w×f

c) 細菌または細胞量

SOD (U/104セル)=[p÷(1-p)×VRV]÷(500×Vs÷Vsv)×f = 0.0228×p÷(1-p)×f

ロープ: 総反応量, 1.026 mL; 対: サンプル量, 0.09 mL;

VSv: 抽出量, 1 mL;

心肺蘇生法: サンプルタンパク質濃度, mg/mL; W: サンプル重量, g;

500: 細菌と細胞の総数, 5 百万. p: 阻害率, %;

F: サンプル希釈倍.

注記:

1. サンプルと試薬は、
2. 多くのサンプルがあるとき, 作業ソリューション (試薬を含むi, IIおよびIII) テーブルに従って構成できます. 試薬Vを追加する必要があります
3. 反応が完了した後, 降水が形成される場合があります, 後に決定できます

実験例:

1. 1 echinochloa crusgalliのgが追加されます 1 均質化のための抽出試薬のml. 上清が服用された後, 操作は、決定手順に従って実行されます. 結果は、Δat= atであることを示しました – ac = 0.335-0.012 = 0.323, Δab= ab1 - ab2 = 0.957-0.003 = 0.954. 阻害率= (ΔAB- ΔAT)÷ΔAB× 100% = 72%, 酵素活性はサンプル質量に従って計算されます.

芝の活動 (U/g質量) = 11.4 ×阻害率 (1-阻害率) ×w = 293.14 U/g質量.

2. 1 抽出試薬のmlが追加されます 0.1 均質化のためのラット脾臓のg. 上清が服用された後, 操作は、決定手順に従って実行されます. 結果は、Δat= atであることを示しました- ac = 0.563-0.213 = 0.35, ΔAB=AB1- AB2 = 0.957-0.003 = 0.954, 阻害率= (ΔAB-ΔAT)÷ΔAB×100％= 31％

芝の活動 (U/g質量) = 11.4 ×阻害率 (1-阻害率) ×w = 196.71 U/g質量.

3. 10 100万個の細胞が抽出され、追加することにより遠心分離されます 1 抽出試薬 mL, そして、操作は決定手順に従って実行されます. 結果は次のとおりです: Δat= at – AC = 614-0.015 = 0.599, ΔAB=AB1- AB2 = 0.944-0.005 = 0.939, 阻害率= (ΔAB- ΔAT) ×ΔAB× 100% = 36.21%

芝の活動 (U/104セル) =阻害率÷ (1-阻害率)×VTS]÷(1000×vs÷vts) = 0.0065 U/104セル.

参考文献:

• スピッツ DR, オバリー L W. 哺乳類組織ホモジネートにおけるスーパーオキシドジスムターゼ活性のためのアッセイ[J]. 分析生化学, 1989,179(1):8-18.
• マサヤス・マサヤス, Y ヒロシ. 臨床用スーパーオキシドジスムターゼ活性の簡易測定法[J]. クリニカ チミカ アクタ, 1979,92(3):337-342.

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