多糖類とポリフェノール植物トータルRNA (プラス) 少量抽出キット

1. 試薬キットのコンポーネント

仕様	50T	100T
猫. いいえ.	SN0305AD	SN0306AD
RNA抽出カラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
DNAクリーンアップカラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
RNA抽出 バッファI	30 ミリリットル	2×30 ミリリットル
阻害剤除去バッファー	30 ミリリットル	2×30 ミリリットル
洗浄バッファー 1	15 ミリリットル	2×15 ミリリットル
溶出バッファー	20 ミリリットル	20 ミリリットル
取扱説明書	1	1

 

2. ストレージ

この試薬キットは、室温で保管できます (15-25℃) 乾燥した環境では安定しています 12 月.

3. 試薬キットを使用するための指示

3.1 このキットは分子生物学の研究目的を目的としており、疾患の診断や治療に使用すべきではありません.

3.2 キットの一部のコンポーネントには刺激物が含まれています; 必要な予防策を講じることをお勧めします (保護服やゴーグルを着用するなど).

3.3 このキットを使用するには、高速遠心分離機などの追加の機器が必要です, 水浴 (メタルバス), 渦ミキサー, 無水エタノール, 液体窒素, クロロホルム, 滅菌脱イオン水, およびEPチューブ.

4. 試薬キットの紹介

この RNA 精製キットは、多糖類とポリフェノールの植物トータル RNA を精製するための迅速かつ効率的な方法を提供します。, ほとんどの多糖類とポリフェノールが豊富な植物組織に適しています. 一般的に, 多糖類とポリフェノールが豊富な植物組織には、高レベルのフェノール二次代謝産物と多糖類が含まれています, RNA抽出効率に大きな影響を与える. このキットは多糖類とポリフェノールを効果的に除去できます。, サンプルから DNA 汚染を効率的に除去するだけでなく、. 実験がDNAに敏感である場合, 下流の実験にはイントロンにまたがるプライマーを使用することをお勧めします.

RNA Fast Purification Kit は植物組織からトータル RNA を抽出できます (核RNAおよび細胞質RNAを含む) 内で 1 時間. 抽出されたRNAは、RTに直接使用できます-PCR, ノーザンブロット, 等. 精製プロセス全体では、フェノールクロロホルムなどの有毒試薬は必要ありません, この RNA 精製キットは他のさまざまな種類のサンプルにも適しています.

5. 実験原則と手順

6. 抽出プロセス

実験を開始する前の注意事項:

あ. ご使用の前に 洗浄バッファー 1, 試薬瓶のラベルに従って指定量の無水エタノールを加えます。, ラベルのボックスをチェックして、絶対エタノールが追加されたことを示してください.

B. 溶出バッファーは 0.1X TEソリューション 最小限のEDTAを含む. EDTAがその後の実験に影響を与える場合, 溶出緩衝液を滅菌脱イオン水に置き換えることをお勧めします.

1. サンプル処理:

あ. マテリアルコレクションとストレージ:

新鮮な材料をすぐに使用できない場合, それらを液体窒素に入れ、-80°Cで保管してください.

B. 可能な場合はいつでも, 新鮮な素材を集める, 多糖類やポリフェノールの含有量が少ないため、.

2. ほぼ粉砕します 100 新鮮なサンプルのmgまたはそれ以上 20 液体窒素を使用した乾燥材料のmg.

3. 追加 600μl RNA抽出バッファーI, 粉砕サンプルにブロック状の組織がないことを確認する. ブロック状の組織は溶解が難しく、RNA 収量が減少する可能性があります.

4. ボルテックス 30 秒.

5. 溶解物の遠心 5 数分 12,000 RPM.

(注記: 多糖類の植物材料は、この段階で多量の粘着性物質を生成する可能性があります。, 後続のステップで RNA を切断できる. したがって, このステップ中にこれらの物質を除去します.)

6. 前のステップで得た上清を DNA Clear Purification Column に移します。, で遠心分離する 12,000 の回転数 30 秒, ろ液を集めます (注記: RNAは濾液に存在します).
7. 追加 250絶対エタノールのμL, ピペッティングでミックスします. 少量の降水量がある場合, 後続の実験には影響しません. RNA精製カラムに液体を追加します, で遠心分離する 12,000 の回転数 30 秒, フロースルーを廃棄します.
8. 追加 700μl 阻害剤除去バッファー RNA精製カラムに, で遠心分離する 12,000 の回転数 30 秒, フロースルーを廃棄します.
9. 追加 700洗浄バッファー μl 1 RNA精製カラムに, で遠心分離する 12,000 の回転数 30 秒, フロースルーを廃棄します.
10. 追加 500洗浄バッファー μl 1 RNA精製カラムに, で遠心分離する 12,000 の回転数 3 分, フロースルーを廃棄します.
11. RNA精製カラムを新しい1.5ml遠心分離機に配置します, 室温で膜を空気乾燥させます 2 分.

(注記: エタノールの添加を洗浄することを確認してください 1. エタノールの存在はその後の実験に大きな影響を与えます. したがって, 膜の乾燥は重要です. 遠心分離後, 溶出前にエタノールがないことを確認してください. 廃棄物とコレクションチューブを捨てます. 洗浄バッファーを使用した後 1, RNA精製カラムの膜はわずかな色のみを持つ必要があります. 遠心分離後にRNA精製カラムを慎重に除去します, エタノール汚染を避けるために、コレクションチューブに触れないようにしてください.)

12. 滴下 50-100溶出バッファー μl 膜に, で遠心分離する 12,000 の回転数 1 分, RNA溶液を収集します.

(注記: 50μl の溶出バッファーで RNA を溶出すると、RNA 濃度は増加しますが、総 RNA 収量は減少します。.)