ピジョンヘルペスウイルス (PiHV) 核酸検査キット (NG, PCR-蛍光プローブ法)

商品番号: AP2409002 仕様: 50T/100T ストレージ: -20℃

製品導入:

ピジョンヘルペスウイルス (PiHV) ピジョン ヘルペス ウイルス タイプによって引き起こされる、主に若いハトに影響を及ぼすウイルス感染症です。 1 (PiHV1). これは、若いハトにおけるハトスクワブ病症候群を引き起こす重要な病原体です。. 臨床的に, 鼻や結膜の炎症などの症状が特徴です。. 感染したハトはうつ病を示すこともあります, 食欲の低下, 下痢, 嘔吐, そして神経症状も. したがって, 早い, 急速な, PiHV の便利な検出は診断に不可欠です, 病気の蔓延を遅らせる, そして合併症の予防. この検査キットは、PiHV 遺伝子の保存配列に基づいて設計されています。, 最適化された条件で, 正確な蛍光定量を可能にする PCR 口頭検査, 総排出腔綿棒, 血, 鳥類からのその他の組織サンプル. これにより、ホストが PiHV に感染しているかどうかを迅速に判断できます。.

商品内容:

試薬成分	AN2409002-02 (50T)	AN2409002-03 (100T)
PiHV検査試薬	1150μL	1150μL× 2
PiHV ポジティブコントロール	100μL	100μL
ネガティブコントロール	100μL	100μL

保管条件:

-20℃で保存, 保存期間は少なくとも 12 月.

実験運用:

1. サンプルの準備 (サンプル準備エリア)

1.1 サンプル要件:

-口腔/局所スワブ: 滅菌綿棒を鳥の喉や総排出腔に挿入します。, 3回回転する. 取り出して遠沈管に入れます, 露出した部分を切り取る, チューブにしっかりと蓋をし、ラベルを貼ります. 内でテストできるサンプル 24 2～8℃で数時間保存可能; すぐに検査できないサンプルは、-20°C で保管してください。.

-全血: 抗凝固剤としてEDTAを使用する; ヘパリンを使用しないでください. 新鮮な全血が必要です, または、2 ～ 8°C で次の期間保存できます。 7 日々, または -20°C で以下の時間 3 月. 凍結融解の繰り返しは可能な限り避けてください。.

-組織: 以下を超えない新鮮な肝臓組織を採取する 100 mg, その後のサンプル調製のために 200 ～ 500μL の滅菌水を使用して組織ホモジネートを調製します。.

1.2 サンプルの準備:

Refer to Sanshibio’s “動物ゲノム DNA 迅速抽出キット (PCR分析用) マニュアル” (カタログNo.: DP202), または関連要件を満たすその他の核酸抽出キット/方法, 処理されたサンプルから核酸を抽出する. 抽出した核酸サンプルはアイスボックスに入れ、できるだけ早く検査する必要があります。; 4°C で以下の期間保存できます。 7 数日または -20°C での保管期間を超えないこと 6 月.

2. 反応系の準備 (サンプル追加エリア)

2.1 キットの各コンポーネントを取り出します, 室温で完全に解凍する, そして遠心分離機にかけます 10 チューブの壁と底のキャップから液体を集めるのに数秒かかります. サンプル数に応じて反応系を準備 (n+2) (つまり, n 個のテストサンプル + 1 ポジティブコントロール + 1 ネガティブコントロール). 具体的には, 準備する (n+2) PCRチューブ, 23μLのPiHV試験試薬を各チューブに分注します, 後で使用するためにアイスボックスに保管してください.

2.2 それから, 2μLのネガティブコントロールを順次加えます, 抽出されたサンプル核酸, 検査試薬に対する PiHV ポジティブコントロール. チューブにしっかりと蓋をし、情報を記録します; 各反応の総量は 25μL である必要があります. 十分に混ぜ合わせてください, 遠心分離機用 10 秒, PCR装置で増幅実験を行う.

3. PCR増幅 (増幅および生成物分析エリア)

50°C UNG 酵素による汚染除去 2 分; 95°C 前変性 2 分; 95℃変性 10 秒, 続いて 60°C でアニーリングし、延伸します。 35 秒, のために 40 サイクル, 60℃で蛍光シグナルを収集. 蛍光チャンネル FAM を選択します (ABI シリーズまたは類似のリアルタイム定量 PCR 装置を使用する場合, 必要に応じて事前にメーカーに問い合わせるか、ROX キャリブレーション色素を自分で追加してください; さもないと, 通常の手順に従ってください).

4. 結果の判定

4.1 実験結果を検証するための条件:

ポジティブコントロールFAMチャンネルCt値 < 28 そして、 “S” 整形された増幅曲線; ネガティブコントロールに Ct 値がない、または Ct 値以上 38 そしていいえ “S” 整形された増幅曲線, 有効な結果を示す; さもないと, 実験を繰り返す. 再試験が無効のままの場合, メーカーの技術担当者にお問い合わせください.

4.2 結果の判定例:

Ct値≦ 33 そして、 “S” 整形された増幅曲線, PiHV陽性と判定される;

Ct値 33 < CT < 38 疑わしいと考えられている; 再検査が推奨されます (核酸抽出が標準以下であるか、強力な阻害性汚染物質が存在する可能性があります (例えば, 消毒剤の残留物, 抗凝固剤) 増幅の阻害; 核酸の抽出と増幅のためにサンプルを再処理することを提案します。; 核酸を再抽出して再検査する前に、エアロゾル汚染による偽陽性結果をまず除外します。). エアロゾル汚染が除外され、FAM チャネルが Ct 値を再検査する場合 < 33 明確な増幅曲線, PiHV陽性と判定される; さもないと, 陰性と判定される;

Ct値なし、またはCt値≧ 38 そしていいえ “S” 整形された増幅曲線はPiHV陰性と判定される.

予防:

• 汚染を防ぐために, 実験は厳密に分割する必要があります, 人的要因による相互汚染を避けるために、パーティション間の物理的な隔離が推奨されます。. 実験中は白衣とラテックス手袋を着用してください, さまざまな領域でツールを独立して使用する, 必要に応じて手袋と白衣を交換する. PCR後, すぐに蓋を開けないでください; エアロゾル汚染を最小限に抑えるために十分に冷却してから開けてください。.
• 使用前に試薬を完全に解凍してください, ただし、凍結融解を繰り返すことは避けてください。. キットに付属のPCR反応チューブは0.2mLです。; 交換が必要な場合, 完全に解凍してから移す. 試薬の調製とサンプルの添加については指示に厳密に従ってください。. ワークステーション, 遠心分離機, ピペット, その他の器具は塩素含有消毒剤で定期的に消毒する必要があります。, アルコール, 核酸除染剤, または紫外線.
• 陰性の結果は、必ずしも宿主がウイルスに感染していないことを意味するわけではありません. サンプルの品質が悪い, ウイルス負荷が低い, または強力な阻害物質の存在 (アルコールなどの, 消毒剤, 抗凝固剤, 等) 核酸抽出が失敗する可能性があります (検出) そして “ネガティブ” 結果. 結果の解釈基準に従ってください, 疑わしい結果が出た場合, まずエアロゾル汚染を除外する. 他にご質問がある場合, メーカーの技術担当者にお問い合わせください.
• この製品は1回限りの使用です. 試薬内の成分は自然光に敏感です; 梱包および保管中に光への曝露を避ける. 梱包後, 凍結融解を繰り返さないでください. 科学研究のみに使用する; 臨床診断やその他の目的ではありません.