- Componenti del kit di reagenti
| Specifiche | 50T | 100T |
| Gatto. NO. | SN0303 | SN0304 |
| RNA Extraction Columns (impostato) | 50 (impostato) | 100 (impostato) |
| DNasi I | 1ml | 1ml |
| 10 × Reaction Buffer | 1 ml | 2 ×1ml |
| Trizol Buffer | 50 ml | 2 × 50 ml |
| Inhibitor Removal Buffer | 30 ml | 2 × 30 ml |
| Tampone di lavaggio 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Tampone di eluizione | 20 ml | 2 ×20 ml |
| Manuale di istruzioni | 1 | 1 |
- Magazzinaggio
Questo kit di reagenti deve essere conservato a temperatura ambiente (15-25℃) in a dry environment and is stable for 12 mesi. DNase I contains a preservative, consentendo il trasporto a temperatura ambiente, ma per la conservazione a lungo termine, dovrebbe essere mantenuto a -20 ℃.
- Istruzioni per l'uso del kit di reagenti
3.1 Questo kit è destinato a scopi di ricerca in biologia molecolare e non deve essere utilizzato per la diagnosi o il trattamento di malattie.
3.2 Alcuni componenti del kit contengono sostanze irritanti; è opportuno prendere le dovute precauzioni (come indossare indumenti protettivi e occhiali protettivi).
3.3 L'utilizzo di questo kit richiede apparecchiature aggiuntive come una centrifuga ad alta velocità, bagnomaria (bagno di metallo), miscelatore a vortice, etanolo anidro, azoto liquido, cloroformio, acqua deionizzata sterile, e tubi EP.
- Introduzione al kit di reagenti
This RNA purification kit utilizes the traditional TRIzol combined with column membrane method for the rapid purification of plant, animal, tessuto, cella, microbial RNA, and fungal hyphae RNA. It is suitable for most species. This RNA purification kit can be applied to plant tissues exceeding 100 mg. The RNA extracted with this kit has extremely low DNA content. If sensitivity to DNA in experiments is a concern, it is recommended to use DNase I digestion on the column.
The RNA Fast Purification Kit can extract total RNA from samples (including nuclear RNA and cytoplasmic RNA) entro 1 ora. The extracted RNA can be directly used for RT-PCR, Northern blotting, e altre applicazioni.
- Principi e procedure sperimentali
- Processo di estrazione
Precauzioni prima di iniziare l'esperimento:
UN. Prima dell'uso, add the specified amount of absolute ethanol to LavareRespingente 1 according to the label on the reagent bottle, and check the box on the label to indicate that absolute ethanol has been added.
B. Il tampone di eluizione è un 0.1x soluzione TE contenente una quantità minima di EDTA. Se l'EDTA influisce sugli esperimenti successivi, it is recommended to replace the Elution Buffer with sterile deionized water.
- Elaborazione del campione:
UN. Tessuto: If fresh materials cannot be used immediately, place them in liquid nitrogen and store them at -80°C. I materiali essiccati possono essere conservati a temperatura ambiente. Grind 30~80 mg of tissue in liquid nitrogen and add 1 ml Trizol buffer for homogenization.
B. Monolayer Cultured Cells: Aspirate the culture medium and add 1 ml Trizol buffer for homogenization.
C. Cell Suspension: Centrifuge to collect cells and add 1 ml Trizol buffer for homogenization.
2. After adding Trizol buffer to the sample, mix thoroughly by pipetting, allow complete sample lysis, e incubare a temperatura ambiente per 5 minuti.
3. Add chloroform in a ratio of 200 μl per 1 ml of Trizol buffer, vigorously shake for 30 secondi, e incubare a temperatura ambiente per 2 minuti.
4. Centrifuge the lysate at 4°C, 12,000 giri al minuto per 10 minuti. RNA will be present in the upper aqueous phase.
5. Trasferire con attenzione il surnatante in una nuova provetta da centrifuga, avoiding the collection of the middle and bottom layers. (Nota: Circa 400 È possibile trasferire μl di liquido, which may be less for some species.)
6. Add an equal volume of pre-chilled absolute ethanol, mix quickly. (Per esempio, aggiungere 400 ml di lisato, aggiungere 400 μl of absolute ethanol. Se il volume del lisato è inferiore a 400 ml, reduce the amount of absolute ethanol proportionally. A slight precipitate may form after adding ethanol, but it does not affect subsequent experiments.)
7. Transfer the obtained liquid to an RNA purification column (circa 650-700 μl per time), centrifuge at more than 8,000 giri al minuto per 1 minuto, scartare i rifiuti raccolti, e reinserire il tubo di raccolta nella colonna di purificazione per il passaggio successivo.
8. Ripeti il passaggio 7, adding the remaining liquid to the RNA purification column, centrifuge at more than 8,000 giri al minuto per 1 minuto, discard the waste and the collection tube.
9. Place the RNA purification column in a new collection tube, aggiungere 300 μl of Inhibitor Removal Buffer, centrifuge at more than 8,000 giri al minuto per 1 minuto, scartare i rifiuti, and reinsert the RNA purification column into the tube for the next step.
10. Aggiungere 80 μl of DNase Iworking solution to the RNA purification column, incubate at 20°C to 30°C for 15 minuti. (Prepare DNase I working solution: 62 μl RNase-Free Water, 8 μl 10× Reaction Buffer, E 10 μl DNase I, make up to 80 μl DNase I working solution.)
11. Aggiungere 300 μl of Inhibitor Removal Bufferto the RNA purification column, centrifuge at more than 8,000 giri al minuto per 1 minuto, scartare i rifiuti, and reinsert the RNA purification column into the tube for the next step.
12. Aggiungere 700 ml di tampone di lavaggio 1to the RNA purification column, centrifugare a 14,000 giri/min (20,000× g) per 2 minuti, extend the centrifugation time if needed for a drier membrane. (Nota: Confirm the addition of ethanol to Wash Buffer 1; ethanol presence significantly affects subsequent experiments. Ensure the membrane is dry after centrifugation before elution. Eliminare i rifiuti e il tubo di raccolta. After using Wash Buffer 1, the membrane on the RNA purification column should only have a slight color. Carefully remove the RNA purification column after centrifugation, ensuring it does not touch the collection tube to avoid ethanol contamination.)
13. Place the RNA purification column in a new centrifuge tube, drip 100 μl di tampone di eluizionesulla membrana, incubate at room temperature for 5 minuti (15°C to 25°C), and centrifuge at more than 8,000 giri al minuto per 1 minuto. (Nota: Eluting RNA with 50 μl of Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)
14. Repeat the previous step. (Nota: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted the second time or continue using the original collection tube to collect RNA.)
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