Specifica: 4*50M.L
Reagente | Composizione |
---|---|
Reagente (UN) | Soluzione di colorazione viola cristallina |
Reagente (B) | Soluzione di differenziazione dell'etanolo acido |
Reagente (C) | Soluzione di colorazione viola di cristallo di ossalato di ammonio |
Reagente (D) | Soluzione di iodio del rifiuto |
Magazzinaggio: Temperatura ambiente, evitare la luce
Descrizione del prodotto:
- Colorazione grammo:
- Invenzione:
- Inventato dal medico danese Christian Gram in 1884.
- Metodo:
- Metodo di colorazione differenziale ampiamente utilizzato in batteriologia.
- Forma di controcolorante.
- Scopo:
- Differenzia i batteri in due classi principali:
- Gram-positivo (G*)
- Gram-negativo (G)
- Differenzia i batteri in due classi principali:
- Meccanismo:
- Colorazione differenziale in base alle differenze in:
- Permeabilità della parete cellulare a etanolo
- Capacità di resistere alla decolorazione
- Spessore e struttura dello strato peptidoglicano
- Colorazione differenziale in base alle differenze in:
- Processo di colorazione:
- Cellule colorate con viola di cristallo e quindi trattate con iodio a forma di complessi insolubili.
- Decolorato dall'etanolo.
- Punti isoelettrici:
- Batteri gram-positivi: punti isoelettrici a pH 2.0-3.0
- Batteri gram-negativi: punti isoelettrici a pH 4.0-5.0
- Proprietà vincolanti:
- I batteri gram-positivi portano più cariche negative.
- Lega più strettamente ai coloranti di base come Crystal Violet.
- Formazione di complesso:
- Dopo l'aggiunta di Mordant (iodio) in cellule batteriche:
- Si forma il complesso cristallino-viola-proteina insolubile in acqua.
- Si lega ai sali di magnesio dell'acido ribonucleico all'interno dei batteri Gram-positivi.
- Dopo l'aggiunta di Mordant (iodio) in cellule batteriche:
- Risultato:
- Batteri colorati meno soggetti alla decolorazione.
- Invenzione:
Passaggi operativi (solo per riferimento):
- Fissazione tissutale in 10% formalina, Incorporamento di disidratazione di routine.
- Tagliare le sezioni a uno spessore di 4μm, e dewax abitualmente ad annaffiare.
- Fette di colorazione per calare in soluzione di colorazione viola cristallina per 5 minuti, Quindi scartare la tintura.
- Differenziare in soluzione di differenziazione dell'etanolo acido per 2-5 secondi.
- Risciacquare con acqua fluente per 3-5 secondi.
- Fette di colorazione a goccia nella soluzione di colorazione viola di cristallo di ossalato di ammonio per 5 minuti, Quindi scartare la tintura. Usa la carta per assorbire delicatamente il liquido in eccesso attorno alle fette.
- Tratta le fette con la soluzione di iodio di Weigert per 1 minuto, Quindi scartare la soluzione di iodio. Assorbi ripetutamente l'umidità all'interno delle fette con carta da filtro.
- Differenziare con la soluzione orto-toluidina-xilene fino a quando non vi è alcun colore viola lisciviazione dalle fette. Lavare immediatamente con xilene, e osservare al microscopio. Ripeti il lavaggio con xilene fresco più volte per rimuovere accuratamente ortotoluidina. Sigillare con resina neutra.
Risultati della colorazione:
- Batteri gram-positivi e cellulosa: Blu-viola
- Batteri gram-negativi: Rosso
- Nucleo cellulare: Rosso
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