Kit per la rilevazione dell'acido nucleico della Salmonella

oggetto numero：AP2308004 Specificazione：24T/48T Magazzinaggio：-20℃

Introduzione al prodotto：

La salmonella è un comune batterio patogeno di origine alimentare che può portare alla salmonellosi, con uova, pollame, e la carne essendo fonti comuni di trasmissione. Questo kit di test utilizza quantitativo fluorescente in tempo reale PCR Tecnologia per amplificare selettivamente segmenti di DNA specifici di Salmonella in campioni come l'acqua, feci, e sospetto cibo contaminato. La presenza di salmonella nel campione può essere determinata dal valore CT, oppure il livello di contaminazione della salmonella nel campione può essere determinato attraverso una curva standard.

Contenuto del prodotto：

Componenti del reagente	AP2308004-01 （24T）	AP2308004-02 （48T）
SOLUZIONE SAL PREMIX	11.5µL/Well × 8wells/Strip × 3Strips	11.5µL/Well × 8wells/Strip × 6Strips
Soluzione di reazione Sal	290μL	575μL
SAL Controllo positivo	100μL	100μL
Controllo negativo	100μL	100μL

Condizioni di stoccaggio：

Conservare a -20 ℃, La durata della conservazione è almeno 12 mesi.

Operazione sperimentale：

1. Preparazione del campione (Area di preparazione del campione)

1.1 Requisiti del campione:

– Tamponi orali e cloacali: Prendi un tampone di cotone sterile, Inseriscilo nella gola dell'uccello o nella cloaca, ruotare tre volte, Mettilo in una tuba di centrifuga, Taglia la parte esposta, chiudere strettamente il cappuccio, ed etichettalo. I campioni che possono essere testati prontamente devono essere conservati a 2-8 ° C all'interno 24 ore, e i campioni che non possono essere testati prontamente devono essere conservati a -20 ° C.

– Sangue intero: Usa EDTA come anticoagulante, Evita eparina anticoagulante, Usa sangue intero fresco, o conservare a 2-8 ° C per non più di 7 giorni, o conservare a -20 ° C per non più di 3 mesi, Evitare i cicli di congelamento ripetuti.

– Tessuto: Prendere muscolo fresco o tessuto di organi non superiori a 100 mg, Usa 200-500 μl di acqua sterile per preparare omogenato di tessuto, e procedere con la successiva preparazione del campione.

1.2 Preparazione del campione:

Secondo il “GB 4789.4-2016 Standard nazionale di sicurezza alimentare – Esame microbiologico alimentare – Test di Salmonella” sezione 5.1 o altri standard applicabili, elaborare il campione per pre-arricchimento, e preparare la sospensione batterica per un uso successivo. Pesare 25 g (ml) del campione e posizionarlo in una tazza di omogeneizzazione sterile contenente 225 ml di acqua peptone tamponata (BPW). Omogeneizzare a 8000 giri/min/min a 10000 giri/min/min per 1 minuto a 2 minuti o posizionarlo in una sacca di omogeneizzazione sterile contenente 225 ml di BPW e omogeneizzare con uno stomaco per 1min a 2 minuti. Se il campione è liquido, L'omogeneizzazione non è necessaria; scuoterlo bene. Se è richiesta la misurazione del pH, Regolare il pH a 6,8 ± 0,2 utilizzando NaOH sterile da 1 ml/ml di NaOH o HCl.. Se si utilizza una borsa di omogeneizzazione, La coltivazione diretta può essere eseguita. Incubare a 36 ° C ± 1 ° C per 8 ore a 18 ore. Se il campione è un prodotto congelato, scongelare a temperature inferiori a 45 ° C per non più di 15 minuti o da 2 ° C a 5 ° C per non più di 18 ore. “DNA totale/Kit di estrazione dell'RNA Manuale” (Catalogare: DP201) o altri kit/metodi di estrazione dell'acido nucleico che soddisfano i requisiti rilevanti per l'estrazione di acido nucleico dai campioni elaborati. Posizionare i campioni di acido nucleico estratto in una ghiacciaia ed eseguire il rilevamento il più presto possibile. Conservare a 4 ° C per non più di 7 giorni o a -20 ° C per non più di 6 mesi.

2. Preparazione del sistema di reazione (Area di reazione)

2.1 Elimina ogni componente del kit, completamente scongelare a temperatura ambiente, centrifuga per 10 secondi, e centrifugare il liquido all'interno della parete del tubo e del tappo del tubo sul fondo del tubo. Preparare la soluzione di reazione in base alla quantità del campione (N+2, dove n è il numero di campioni, Si consiglia di configurare 1 controllo positivo e 1 Controllo negativo per ogni esperimento). Metodo di preparazione specifico: Prendere (N+2) Tubi di reazione contenenti soluzione SAL Premix, Aggiungi 11,5 µl di soluzione di reazione PIHV a ciascun tubo, Usa una pipetta per mescolare accuratamente, 23µl per pozzo, e conservare in un dispositivo di raffreddamento.

2.2 Quindi aggiungere sequenzialmente 2μl di controllo negativo, acido nucleico del campione estratto, e il controllo positivo di Sal alla soluzione di reazione. Chiudi il tappo del tubo, fare un record, e il volume totale di ciascuna reazione è 25 μl. Mescolare accuratamente, centrifuga per 10 secondi, ed eseguire esperimenti di amplificazione sullo strumento PCR.

3. Amplificazione PCR (Area di amplificazione e analisi del prodotto)

Pre-denaturazione a 95 ° C per 2 minuti; Denaturazione a 95 ° C per 10 secondi, ricottura ed estensione a 60 ° C per 35 secondi, 40 cicli. Raccogli segnali di fluorescenza a 60 ° C. Scegli il canale di fluorescenza FAM (Usa strumenti quantitative PCR quantitativi in ​​tempo reale come la serie ABI, se necessario, Contatta il produttore o aggiungi il colorante di correzione ROX; Altrimenti, Seguire le procedure normali).

4. Interpretazione del risultato

4.1 Condizioni per la validità dell'esperimento:

Controllo positivo: Valore CT nel canale FAM < 28 e l'aspetto di un “S”-curva di amplificazione a forma di sagoma. Controllo negativo: Nessun valore CT o valore CT ≥ 40 e no “S”-curva di amplificazione a forma di sagoma. I risultati dell'esperimento sono validi in queste condizioni; Altrimenti, Ripeti l'esperimento. Se i test ripetuti non sono ancora validi, Si prega di contattare il personale tecnico del produttore.

4.2 Interpretazione dei risultati del campione:

Valore CT ≤ 35 con un “S”-La curva di amplificazione sagomata è considerata positiva per l'acido nucleico di Salmonella. Valore CT tra 35 E 40 è considerato sospetto, e si raccomanda il test di ripetizione. Ciò può essere dovuto all'estrazione di acido nucleico scadente o alla presenza di forti sostanze inibitorie (come disinfettanti residui, anticoagulanti, eccetera.). Si suggerisce di ritrattare il campione per l'estrazione e l'amplificazione dell'acido nucleico. Primo, escludere “falso positivo” Risultati causati dalla contaminazione dell'aerosol, Quindi riestra e testare l'acido nucleico. Se, Dopo aver escluso la contaminazione dell'aerosol, Il retro del canale FAM mostra un valore CT < 35 con una curva di amplificazione chiara, è considerato positivo; Altrimenti, è considerato negativo.

Nessun valore CT o valore CT ≥ 40 e no “S”-La curva di amplificazione sagomata è considerata negativa per l'acido nucleico di Salmonella.

Precauzioni：

• Per prevenire la contaminazione, L'esperimento dovrebbe essere rigorosamente partizionato, e l'isolamento fisico tra le partizioni è preferito per evitare la contaminazione incrociata dovuta a fattori umani. Indossare cappotti da laboratorio e guanti in lattice durante l'esperimento, Usa gli strumenti indipendentemente in diverse aree, Cambia guanti e cappotti da laboratorio quando necessario. Dopo PCR, Non aprire immediatamente il coperchio; Aprilo dopo un sufficiente raffreddamento per ridurre al minimo la contaminazione dell'aerosol.
• Scongelare i reagenti completamente prima dell'uso, ma evita i ripetuti cicli di congelamento. I tubi di reazione PCR forniti nel kit sono 0,2 ml; Se è necessaria la sostituzione, trasferimento dopo lo scongelamento completo. Seguire rigorosamente le istruzioni per la preparazione del reagente e l'aggiunta del campione. Stazioni di lavoro, centrifughe, Pipette, e altri strumenti dovrebbero essere disinfettati regolarmente con disinfettanti contenenti cloro, Alcool, agenti di decontaminazione dell'acido nucleico, o luce UV.
• Un risultato negativo non significa necessariamente che l'ospite non sia infetto dal virus. Scarsa qualità del campione, basso carico di virus, o la presenza di forti sostanze inibitorie (come l'alcol, disinfettanti, anticoagulanti, eccetera.) può provocare un'estrazione di acido nucleico infruttuoso (rilevamento) e a “negativo” risultato. Segui i criteri di interpretazione dei risultati, E quando ci sono risultati sospetti, prima escludere la contaminazione dell'aerosol. Se ci sono altre domande, contattare il personale tecnico del produttore.
• Questo prodotto è solo per uso una tantum. I componenti nel reagente sono sensibili alla luce naturale; Evita l'esposizione alla luce durante l'imballaggio e lo stoccaggio. Dopo l'imballaggio, Non congelare ripetutamente-scongela. Solo per uso di ricerca scientifica; non per diagnosi clinica o altri scopi.