Herpesvirus del piccione (PiHV) Kit per il test degli acidi nucleici (UNG, Metodo con sonda fluorescente PCR)

oggetto numero: AP2409002 Specifica: 50T/100T Magazzinaggio: -20℃

Introduzione al prodotto:

Herpesvirus del piccione (PiHV) is a viral infectious disease primarily affecting young pigeons caused by Pigeon Herpesvirus Type 1 (PIHV1). It is an important pathogen leading to pigeon squab disease syndrome in young pigeons. Clinically, it is characterized by symptoms such as nasal and conjunctival inflammation. Infected pigeons may also exhibit depression, diminuzione dell'appetito, diarrea, vomito, e sintomi neurologici. Perciò, early, rapido, e una comoda rilevazione di PIHV è cruciale per la diagnosi, slowing the spread of the disease, and preventing complications. This test kit is designed based on the conserved sequences in the PiHV gene, with optimized conditions, enabling accurate fluorescent quantitative PCR testing of oral, cloacal swabs, sangue, e altri campioni di tessuto dagli uccelli. This allows for a quick determination of whether the host is infected with PiHV.

Contenuto del prodotto:

Componenti del reagente	AN2409002-02 (50T)	AN2409002-03 (100T)
PiHV Testing Reagent	1150μL	1150µL× 2
PiHV Positive Control	100μL	100μL
Negative Control	100μL	100μL

Condizioni di stoccaggio:

Conservare a -20 ℃, La durata della conservazione è almeno 12 mesi.

Operazione sperimentale:

1. Preparazione del campione (Area di preparazione del campione)

1.1 Requisiti del campione:

-Oral/Clocal Swab: Use a sterile cotton swab to insert into the bird’s throat or cloaca, rotating three times. Remove it and place it in a centrifuge tube, cutting off the exposed part, then securely cap the tube and label it. Samples that can be tested within 24 hours can be stored at 2-8°C; samples that cannot be tested promptly should be stored at -20°C.

-Whole Blood: Usa EDTA come anticoagulante; do not use heparin. Fresh whole blood is required, or it can be stored at 2-8°C for no more than 7 giorni, or at -20°C for no more than 3 mesi. Repeated freeze-thaw cycles should be avoided as much as possible.

-Tessuto: Take fresh liver tissue not exceeding 100 mg, and prepare a tissue homogenate using 200-500μL of sterile water for subsequent sample preparation.

1.2 Preparazione del campione:

Refer to Sanshibio’s “Animal Genome DNA Rapid Extraction Kit (Per analisi PCR) Manuale” (Catalog No.: DP202), o altri kit/metodi di estrazione dell'acido nucleico che soddisfano i requisiti rilevanti, to extract nucleic acids from processed samples. The extracted nucleic acid samples should be placed in an ice box and tested as soon as possible; they can be stored at 4°C for no more than 7 giorni o a -20 ° C per non più di 6 mesi.

2. Prepare the Reaction System (Area aggiuntiva del campione)

2.1 Elimina ogni componente del kit, completamente scongelare a temperatura ambiente, e centrifuga per 10 seconds to collect liquid from the tube walls and caps at the bottom. Prepare the reaction system according to the number of samples (N+2) (i.e., n test samples + 1 controllo positivo + 1 controllo negativo). Specifically, preparare (N+2) PCR tubes, dispensing 23μL of the PiHV Testing Reagent into each tube, and keep them in an ice box for later use.

2.2 Poi, sequentially add 2μL of the Negative Control, acido nucleico del campione estratto, and PiHV Positive Control to the testing reagent. Cap the tubes securely and record the information; the total volume for each reaction should be 25μL. Mescolare accuratamente, centrifuga per 10 secondi, and conduct the amplification experiment in the PCR instrument.

3. Amplificazione PCR (Area di amplificazione e analisi del prodotto)

50°C UNG enzyme decontamination for 2 minuti; 95°C pre-denaturation for 2 minuti; 95°C denaturation for 10 secondi, followed by 60°C annealing and extension for 35 secondi, per 40 cicli, collecting fluorescence signals at 60°C. Select the fluorescence channel FAM (if using ABI series or similar real-time quantitative PCR instruments, contact the manufacturer in advance if needed or add ROX calibration dye yourself; Altrimenti, Seguire la normale procedura).

4. Result Determination

4.1 Conditions for Validating Experimental Results:

Valore CT CT CT di controllo di controllo positivo < 28 and exhibits an “S” curva di amplificazione a forma di sagoma; Il controllo negativo non ha valore CT o valore CT ≥ 38 e no “S” curva di amplificazione a forma di sagoma, indicating valid results; Altrimenti, Ripeti l'esperimento. If retesting remains invalid, Si prega di contattare il personale tecnico del produttore.

4.2 Sample Result Determination:

Valore CT ≤ 33 and exhibits an “S” curva di amplificazione a forma di sagoma, judged as PiHV positive;

Valore CT 33 < Ct < 38 è considerato sospetto; retesting is recommended (nucleic acid extraction may be substandard or there are strong inhibitory contaminants (per esempio., residues from disinfectants, anticoagulanti) inhibiting amplification; suggest reprocessing the sample for nucleic acid extraction and amplification; first rule out false positive results caused by aerosol contamination before re-extracting nucleic acids and retesting). If aerosol contamination is ruled out and the FAM channel retesting Ct value < 33 con una curva di amplificazione chiara, it is determined as PiHV positive; Altrimenti, è determinato come negativo;

Nessun valore CT o valore CT ≥ 38 e no “S” shaped amplification curve is determined as PiHV negative.

Precauzioni:

• Per prevenire la contaminazione, L'esperimento dovrebbe essere rigorosamente partizionato, e l'isolamento fisico tra le partizioni è preferito per evitare la contaminazione incrociata dovuta a fattori umani. Indossare cappotti da laboratorio e guanti in lattice durante l'esperimento, Usa gli strumenti indipendentemente in diverse aree, Cambia guanti e cappotti da laboratorio quando necessario. Dopo PCR, Non aprire immediatamente il coperchio; Aprilo dopo un sufficiente raffreddamento per ridurre al minimo la contaminazione dell'aerosol.
• Scongelare i reagenti completamente prima dell'uso, ma evita i ripetuti cicli di congelamento. I tubi di reazione PCR forniti nel kit sono 0,2 ml; Se è necessaria la sostituzione, trasferimento dopo lo scongelamento completo. Seguire rigorosamente le istruzioni per la preparazione del reagente e l'aggiunta del campione. Stazioni di lavoro, centrifughe, Pipette, e altri strumenti dovrebbero essere disinfettati regolarmente con disinfettanti contenenti cloro, Alcool, agenti di decontaminazione dell'acido nucleico, o luce UV.
• Un risultato negativo non significa necessariamente che l'ospite non sia infetto dal virus. Scarsa qualità del campione, basso carico di virus, o la presenza di forti sostanze inibitorie (come l'alcol, disinfettanti, anticoagulanti, eccetera.) può provocare un'estrazione di acido nucleico infruttuoso (rilevamento) e a “negativo” risultato. Segui i criteri di interpretazione dei risultati, E quando ci sono risultati sospetti, prima escludere la contaminazione dell'aerosol. Se ci sono altre domande, contattare il personale tecnico del produttore.
• Questo prodotto è solo per uso una tantum. I componenti nel reagente sono sensibili alla luce naturale; Evita l'esposizione alla luce durante l'imballaggio e lo stoccaggio. Dopo l'imballaggio, Non congelare ripetutamente-scongela. Solo per uso di ricerca scientifica; non per diagnosi clinica o altri scopi.