Herpesvirus del piccione (PiHV) Kit per il test degli acidi nucleici

Herpesvirus del piccione (PiHV) Kit per il test degli acidi nucleici (PCR-Metodo della sonda fluorescente)

oggetto numero： AP2308002 Specificazione：24T/48T /96T Magazzinaggio：-20℃

Introduzione al prodotto：

• Herpesvirus del piccione (PiHV) Infezione:
  • Malattia virale infettiva che colpisce principalmente giovani piccioni causati dal tipo di herpesvirus piccione 1 (PIHV1).
  • Patogeno importante che porta alla sindrome della malattia da squab di piccioni nei giovani piccioni.
  • Clinicamente caratterizzato da sintomi come l'infiammazione nasale e congiuntivale, depressione, diminuzione dell'appetito, diarrea, vomito, e sintomi neurologici.
• Importanza del rilevamento:
  • Presto, rapido, e una comoda rilevazione di PIHV è cruciale per la diagnosi.
  • Aiuta a rallentare la diffusione della malattia e prevenire le complicanze.
• Descrizione del kit di prova:
  • Progettato basato su sequenze conservate nel gene PIHV.
  • Condizioni ottimizzate consentono un test PCR quantitativo fluorescente accurato.
  • Accetta orale, e tamponi cloacali, sangue, e altri campioni di tessuto dagli uccelli.
  • Consente una rapida determinazione dell'infezione PIHV nell'host.

Contenuto del prodotto：

Componenti del reagente	AP2308002-01 （24T）	AP2308002-02 （48T）
Soluzione Premix PIHV	11.5µL/Well × 8wells/Strip × 3 strisce	11.5µL/Well × 8wells/Strip × 6Strips
Soluzione di reazione PIHV	290μL	575μL
Controllo positivo PIHV	100μL	100μL
Controllo negativo	100μL	100μL

Condizioni di stoccaggio：

Conservare a -20 ℃, La durata della conservazione è almeno 12 mesi.

Operazione sperimentale：

1. Preparazione del campione (Area di preparazione del campione)

1.1 Requisiti del campione:

– Tamponi orali e cloacali: Prendi un tampone di cotone sterile, Inseriscilo nella gola dell'uccello o nella cloaca, ruotare tre volte, Mettilo in una tuba di centrifuga, Taglia la parte esposta, chiudere strettamente il cappuccio, ed etichettalo. I campioni che possono essere testati prontamente devono essere conservati a 2-8 ° C all'interno 24 ore, e i campioni che non possono essere testati prontamente devono essere conservati a -20 ° C.

– Sangue intero: Usa EDTA come anticoagulante, Evita eparina anticoagulante, Usa sangue intero fresco, o conservare a 2-8 ° C per non più di 7 giorni, o conservare a -20 ° C per non più di 3 mesi, Evitare i cicli di congelamento ripetuti.

– Tessuto: Prendere muscolo fresco o tessuto di organi non superiori a 100 mg, Usa 200-500 μl di acqua sterile per preparare omogenato di tessuto, e procedere con la successiva preparazione del campione.

1.2 Preparazione del campione:

Fare riferimento al sanshibio “Kit di estrazione rapida del DNA genomico animale (per l'analisi PCR)” manuale (Catalogare: DP202), o altri kit/metodi di estrazione dell'acido nucleico che soddisfano i requisiti rilevanti, Per l'estrazione di acido nucleico dei campioni trasformati. Posizionare l'acido nucleico del campione estratto in un dispositivo di raffreddamento e testare il prima possibile. Conservare a 4 ° C per non più di 7 giorni o a -20 ° C per non più di 6 mesi.

2. Preparazione del sistema di reazione (Area di reazione)

2.1 Elimina ogni componente del kit, completamente scongelare a temperatura ambiente, centrifuga per 10 secondi, e centrifugare il liquido all'interno della parete del tubo e del tappo del tubo sul fondo del tubo. Preparare la soluzione di reazione in base alla quantità del campione (N+2, dove n è il numero di campioni, Si consiglia di configurare 1 controllo positivo e 1 Controllo negativo per ogni esperimento). Metodo di preparazione specifico: Prendere (N+2) tubi di reazione contenenti soluzione Premix PIHV, Aggiungi 11,5 µl di soluzione di reazione PIHV a ciascun tubo, Usa una pipetta per mescolare accuratamente, 23µl per pozzo, e conservare in un dispositivo di raffreddamento.

2.2 Quindi aggiungere sequenzialmente 2μl di controllo negativo, acido nucleico del campione estratto, e il controllo positivo di PIHV alla soluzione di reazione. Chiudi il tappo del tubo, fare un record, e il volume totale di ciascuna reazione è 25 μl. Mescolare accuratamente, centrifuga per 10 secondi, ed eseguire esperimenti di amplificazione sullo strumento PCR.

3. Amplificazione PCR (Area di amplificazione e analisi del prodotto)

Pre-denaturazione a 95 ° C per 2 minuti; Denaturazione a 95 ° C per 10 secondi, ricottura ed estensione a 60 ° C per 35 secondi, 40 cicli. Raccogli segnali di fluorescenza a 60 ° C. Scegli il canale di fluorescenza FAM (Usa strumenti quantitative PCR quantitativi in ​​tempo reale come la serie ABI, se necessario, Contatta il produttore o aggiungi il colorante di correzione ROX; Altrimenti, Seguire le procedure normali).

4. Interpretazione del risultato

4.1 Condizioni per la validità dell'esperimento:

Valore CT CT CT di controllo di controllo positivo < 28 e a “S”-Si osserva una curva di amplificazione sagomata; Il controllo negativo non ha valore CT o valore CT ≥ 38 e no “S”-curva di amplificazione a forma di sagoma, L'esperimento è valido. Altrimenti, Ripeti l'esperimento; Se l'esperimento di ripetizione non è ancora valido, contattare il personale tecnico del produttore.

4.2 Interpretazione dei risultati del campione:

Valore CT ≤ 33 e un “S”-La curva di amplificazione sagomata indica PIHV positivo;

Valore CT tra 33 < Ct < 38 è considerato sospetto, e si raccomanda un test. Se il valore CT di nuovo canale FAM è < 33 Dopo aver escluso la contaminazione dell'aerosol e c'è una chiara curva di amplificazione, è considerato PIHV positivo, altrimenti considerato negativo;

Nessun valore CT o valore CT ≥ 38 e no “S”-La curva di amplificazione a forma indica PIHV negativa.

Precauzioni：

• Per prevenire la contaminazione, L'esperimento dovrebbe essere rigorosamente partizionato, e l'isolamento fisico tra le partizioni è preferito per evitare la contaminazione incrociata dovuta a fattori umani. Indossare cappotti da laboratorio e guanti in lattice durante l'esperimento, Usa gli strumenti indipendentemente in diverse aree, Cambia guanti e cappotti da laboratorio quando necessario. Dopo PCR, Non aprire immediatamente il coperchio; Aprilo dopo un sufficiente raffreddamento per ridurre al minimo la contaminazione dell'aerosol.
• Scongelare i reagenti completamente prima dell'uso, ma evita i ripetuti cicli di congelamento. I tubi di reazione PCR forniti nel kit sono 0,2 ml; Se è necessaria la sostituzione, trasferimento dopo lo scongelamento completo. Seguire rigorosamente le istruzioni per la preparazione del reagente e l'aggiunta del campione. Stazioni di lavoro, centrifughe, Pipette, e altri strumenti dovrebbero essere disinfettati regolarmente con disinfettanti contenenti cloro, Alcool, agenti di decontaminazione dell'acido nucleico, o luce UV.
• Un risultato negativo non significa necessariamente che l'ospite non sia infetto dal virus. Scarsa qualità del campione, basso carico di virus, o la presenza di forti sostanze inibitorie (come l'alcol, disinfettanti, anticoagulanti, eccetera.) può provocare un'estrazione di acido nucleico infruttuoso (rilevamento) e a “negativo” risultato. Segui i criteri di interpretazione dei risultati, E quando ci sono risultati sospetti, prima escludere la contaminazione dell'aerosol. Se ci sono altre domande, contattare il personale tecnico del produttore.
• Questo prodotto è solo per uso una tantum. I componenti nel reagente sono sensibili alla luce naturale; Evita l'esposizione alla luce durante l'imballaggio e lo stoccaggio. Dopo l'imballaggio, Non congelare ripetutamente-scongela. Solo per uso di ricerca scientifica; non per diagnosi clinica o altri scopi.