Adenovirus del piccione (PiADV) Kit per il rilevamento dell'acido nucleico

oggetto numero：AP2308005 Specificazione：24T/48T Magazzinaggio：-20℃

Introduzione al prodotto：

• Adenovirus del piccione (PiADV) is a common and highly contagious adenovirus that infects birds such as pigeons and parrots, serving as the causative agent of acute infectious diseases, including squab adenitis.
• This virus is highly transmissible, capable of vertical transmission through egg laying, as well as horizontal transmission through direct or indirect contact.
• Currently, there are no specific antiviral drugs for PiADV, making early, rapido, and convenient detection of PiADV crucial for diagnosis, and treatment, slowing the spread of the disease, and preventing complications.
• This detection kit is designed based on the conservative sequences in the PiADV genome, utilizing primers and probes.
• Through system optimization, it enables precise fluorescence quantitative PCR testing of oral cloacal swabs, sangue, e altri campioni di tessuto dagli uccelli.
• This facilitates the rapid and accurate determination of PiADV infection in the host.

Contenuto del prodotto：

Componenti del reagente	AP2308005-01（24T）	AP2308005-02（48T）
PiADV Premix Solution	11.5µL/Well × 8wells/Strip × 3Strips	11.5µL/Well × 8wells/Strip × 6Strips
PiADV Reaction Solution	290μL	575μL
PiADV Positive control	100μL	100μL
Controllo negativo	100μL	100μL

Condizioni di stoccaggio：

Conservare a -20 ℃, La durata della conservazione è almeno 12 mesi.

Operazione sperimentale：

1. Preparazione del campione (Area di preparazione del campione)

1.1 Requisiti del campione:

– Tamponi orali e cloacali: Prendi un tampone di cotone sterile, Inseriscilo nella gola dell'uccello o nella cloaca, ruotare tre volte, Mettilo in una tuba di centrifuga, Taglia la parte esposta, chiudere strettamente il cappuccio, ed etichettalo. I campioni che possono essere testati prontamente devono essere conservati a 2-8 ° C all'interno 24 ore, e i campioni che non possono essere testati prontamente devono essere conservati a -20 ° C.

– Sangue intero: Usa EDTA come anticoagulante, Evita eparina anticoagulante, Usa sangue intero fresco, o conservare a 2-8 ° C per non più di 7 giorni, o conservare a -20 ° C per non più di 3 mesi, Evitare i cicli di congelamento ripetuti.

– Tessuto: Prendere muscolo fresco o tessuto di organi non superiori a 100 mg, Usa 200-500 μl di acqua sterile per preparare omogenato di tessuto, e procedere con la successiva preparazione del campione.

1.2 Preparazione del campione:

Refer to the SanshiBio Bio “Kit di estrazione rapida del DNA genomico animale (per l'analisi PCR)” manuale (Catalogare: DP202), o altri kit/metodi di estrazione dell'acido nucleico che soddisfano i requisiti rilevanti, Per l'estrazione di acido nucleico dei campioni trasformati. Posizionare l'acido nucleico del campione estratto in un dispositivo di raffreddamento e testare il prima possibile. Conservare a 4 ° C per non più di 7 giorni o a -20 ° C per non più di 6 mesi.

2. Preparazione del sistema di reazione (Area di reazione)

2.1 Elimina ogni componente del kit, completamente scongelare a temperatura ambiente, centrifuga per 10 secondi, e centrifugare il liquido all'interno della parete del tubo e del tappo del tubo sul fondo del tubo. Preparare la soluzione di reazione in base alla quantità del campione (N+2, dove n è il numero di campioni, Si consiglia di configurare 1 controllo positivo e 1 Controllo negativo per ogni esperimento). Metodo di preparazione specifico: Prendere (N+2) reaction tubes containing PiADV premix solution, add 11.5µL of PiADV reaction solution to each tube, Usa una pipetta per mescolare accuratamente, 23µl per pozzo, e conservare in un dispositivo di raffreddamento.

2.2 Quindi aggiungere sequenzialmente 2μl di controllo negativo, acido nucleico del campione estratto, and PiADV positive control to the reaction solution. Chiudi il tappo del tubo, fare un record, e il volume totale di ciascuna reazione è 25 μl. Mescolare accuratamente, centrifuga per 10 secondi, ed eseguire esperimenti di amplificazione sullo strumento PCR.

3. Amplificazione PCR (Area di amplificazione e analisi del prodotto)

Pre-denaturazione a 95 ° C per 2 minuti; Denaturazione a 95 ° C per 10 secondi, ricottura ed estensione a 60 ° C per 35 secondi, 40 cicli. Raccogli segnali di fluorescenza a 60 ° C. Scegli il canale di fluorescenza FAM (Usa strumenti quantitative PCR quantitativi in ​​tempo reale come la serie ABI, se necessario, Contatta il produttore o aggiungi il colorante di correzione ROX; Altrimenti, Seguire le procedure normali).

4. Interpretazione del risultato

4.1 Condizioni per la validità dell'esperimento:

Valore CT CT CT di controllo di controllo positivo < 28 e a “S”-Si osserva una curva di amplificazione sagomata; Il controllo negativo non ha valore CT o valore CT ≥ 38 e no “S”-curva di amplificazione a forma di sagoma, L'esperimento è valido. Altrimenti, Ripeti l'esperimento; Se l'esperimento di ripetizione non è ancora valido, contattare il personale tecnico del produttore.

4.2 Interpretazione dei risultati del campione:

Valore CT ≤ 33 e un “S”-shaped amplification curve indicate PiADV positive;

Valore CT tra 33 < Ct < 38 è considerato sospetto, e si raccomanda un test. Se il valore CT di nuovo canale FAM è < 33 Dopo aver escluso la contaminazione dell'aerosol e c'è una chiara curva di amplificazione, it is considered PiADV positive, altrimenti considerato negativo;

Nessun valore CT o valore CT ≥ 38 e no “S”-shaped amplification curve indicate PiADV negative.

Precauzioni：

• Per prevenire la contaminazione, L'esperimento dovrebbe essere rigorosamente partizionato, e l'isolamento fisico tra le partizioni è preferito per evitare la contaminazione incrociata dovuta a fattori umani. Indossare cappotti da laboratorio e guanti in lattice durante l'esperimento, Usa gli strumenti indipendentemente in diverse aree, Cambia guanti e cappotti da laboratorio quando necessario. Dopo PCR, Non aprire immediatamente il coperchio; Aprilo dopo un sufficiente raffreddamento per ridurre al minimo la contaminazione dell'aerosol.
• Scongelare i reagenti completamente prima dell'uso, ma evita i ripetuti cicli di congelamento. I tubi di reazione PCR forniti nel kit sono 0,2 ml; Se è necessaria la sostituzione, trasferimento dopo lo scongelamento completo. Seguire rigorosamente le istruzioni per la preparazione del reagente e l'aggiunta del campione. Stazioni di lavoro, centrifughe, Pipette, e altri strumenti dovrebbero essere disinfettati regolarmente con disinfettanti contenenti cloro, Alcool, agenti di decontaminazione dell'acido nucleico, o luce UV.
• Un risultato negativo non significa necessariamente che l'ospite non sia infetto dal virus. Scarsa qualità del campione, basso carico di virus, o la presenza di forti sostanze inibitorie (come l'alcol, disinfettanti, anticoagulanti, eccetera.) può provocare un'estrazione di acido nucleico infruttuoso (rilevamento) e a “negativo” risultato. Segui i criteri di interpretazione dei risultati, E quando ci sono risultati sospetti, prima escludere la contaminazione dell'aerosol. Se ci sono altre domande, contattare il personale tecnico del produttore.
• Questo prodotto è solo per uso una tantum. I componenti nel reagente sono sensibili alla luce naturale; Evita l'esposizione alla luce durante l'imballaggio e lo stoccaggio. Dopo l'imballaggio, Non congelare ripetutamente-scongela. Solo per uso di ricerca scientifica; non per diagnosi clinica o altri scopi.