Nota: Questo prodotto deve essere imballato con sacche di ghiaccio e spedito tramite FedEx o UPS.
Arriverà all'interno 7-10 giorni. La commissione di spedizione è inclusa nel prezzo del prodotto.
Introduzione al prodotto：
This test kit is designed to amplify and detect the conserved gene of the Psittacine Beak and Feather Disease Virus (PBFDV) in samples such as bird feathers, sangue, tessuti, oral swabs, e tamponi cloacali. Introducing an endogenous internal reference, it allows for monitoring of the nucleic acid extraction and amplification processes, ensuring the accuracy of the detection results.
Contenuto del prodotto：
| Componenti del reagente | AP2304002-01（24T） | AP2304002-02（48T） |
| PBFDV reaction solution | 23µL/Well × 8wells/Strip × 3Strips | 23µL/Well × 8wells/Strip × 6stips |
| PBFDV Positive control | 100μL | 100μL |
| Controllo negativo | 100μL | 100μL |
Condizioni di stoccaggio：
Conservare a -20 ℃, La durata della conservazione è almeno 12 mesi
Operazione sperimentale：
1. preparazione del campione (Area di preparazione del campione)
1.1 Requisiti del campione：
Piume: Raccogliere 5 piume dal petto, addome, o gambe (compresa la porzione di piuma), e non usare le piume per capannoni naturali.
Sangue: Usa EDTA come anticoagulante, Non usare l'eparina come anticoagulante. Dovrebbe essere usato il sangue intero fresco, oppure può essere conservato a 2 ~ 8 ℃ fino a 7 giorni, o conservato a -20 ℃ fino a 3 mesi. Evitare il più possibile congelamento e scongelamento.
Tessuto: Prendi muscoli freschi o tessuto di organi (Evita di usare campioni con pelle, tendini, o fascia difficile da elaborare) di non più di 100 mg. Preparare omogenato di tessuto usando 200-500 μl di acqua sterile, e quindi procedere con la successiva preparazione del campione.
1.2 preparazione del campione：
Please refer to the manual of the Three Lions Biotech “Kit di estrazione rapida del DNA genomico animale (per PCR analisi)” (Numero parte: DP202), o altri kit/metodi di estrazione dell'acido nucleico che soddisfano i requisiti rilevanti, Per l'estrazione di campioni elaborati. Posizionare l'acido nucleico del campione estratto in una ghiacciaia e provare a procedere prontamente ai test. Può essere conservato a 4 ° C fino a fino a 7 giorni o a -20 ° C fino a fino a 6 mesi.
2 . Preparazione del sistema di reazione (Area di reazione per l'aggiunta di campioni).
2.1 Remove n+2 reaction tubes (n representing the number of test samples) containing PBFDV positive control, controllo negativo, and the required PBFDV reaction solution. Scongelare i reagenti completamente a temperatura ambiente, centrifuga per 10 secondi, and then centrifuge the liquid inside the tube walls and caps to the bottom. Store the tubes in an icebox for later use.
2.2 Add 2μL of negative control, acido nucleico del campione estratto, and PBFDV positive control in sequence to the reaction solution. Close the tube caps tightly, make necessary records, and ensure that each reaction has a total volume of 25μL. Thoroughly mix the contents and centrifuge for 10 seconds before conducting the amplification experiment on the Macchina per PCR.
3. Amplificazione PCR (Area di amplificazione e analisi del prodotto).
Il processo di amplificazione PCR è il seguente: Pre-denaturazione a 95 ℃ per 3 minuti; Denaturazione a 95 ℃ per 10 secondi, Ricottura ed estensione a 60 ℃ per 40 secondi, per un totale di 35 cicli. Raccogli segnali di fluorescenza a 60 ℃. Nel rilevamento della fluorescenza, Seleziona Fam per il primo canale (for APV-specific gene), e seleziona Vic/Hex per il secondo canale (per il gene di riferimento endogeno). Se si utilizza uno strumento PCR quantitativo di fluorescenza in tempo reale della serie ABI, È possibile contattare il produttore in anticipo o aggiungere da solo la tintura di calibrazione ROX; Altrimenti, Seguire la normale procedura.
4. Determinazione dei risultati
4.1 Se i valori CT del controllo positivo sia nel canale FAM e nel canale VIC/HEX <30 e mostra un “S”-curva di amplificazione a forma di sagoma, e il controllo negativo non ha valore CT o un valore CT ≥35 e no “S”-curva di amplificazione a forma di sagoma, Il risultato sperimentale è valido. Altrimenti, L'esperimento dovrebbe essere ripetuto, E se l'esperimento ripetuto è ancora non valido, Si prega di contattare il personale tecnico.
4.2 Il valore CT del campione nel canale Vic/Hex dovrebbe essere ≤32 e mostrare un “S”-curva di amplificazione a forma di sagoma, indicando che l'estrazione e l'amplificazione del campione sono efficaci. Se non esiste un valore CT o il valore CT è 32 < CT ≤ 35 nel canale Vic/Hex, Indica che l'estrazione dell'acido nucleico del campione non è all'altezza o c'è una forte interferenza di inibizione (come residui di alcol o disinfettanti, anticoagulanti, eccetera.) Ciò inibisce l'amplificazione. Si consiglia di ritrattare il campione per l'estrazione e l'amplificazione dell'acido nucleico.
4.3 Dopo il rilevamento nel canale Vic/Hex è valido, La determinazione nel canale FAM viene eseguita come segue:
- Valore CT ≤ 32 e un “S”-Si osserva una curva di amplificazione sagomata, è determinato come positivo per APV, indicando la presenza di virus APV nel campione.
- Il valore CT è 32 < Ct < 35, it is considered suspicious, e il campione dovrebbe essere ritestato (Riestrando e testando l'acido nucleico, Si suggerisce di escludere prima “falso positivo” Risultati causati dalla contaminazione dell'aerosol ambientale). Se il test nel canale FAM dopo aver escluso la contaminazione dell'aerosol mostra un valore CT < 35 e una chiara curva di amplificazione, è determinato come positivo per APV; Altrimenti, è determinato come negativo.
- Nessun valore CT o valore CT ≥ 35 e no “S”-curva di amplificazione a forma di sagoma, è determinato come negativo per APV, indicando che il virus APV non è stato rilevato nel campione.
Precauzioni：
1）To prevent contamination, L'esperimento dovrebbe essere condotto rigorosamente con operazioni partizionate. È preferibile avere l'isolamento fisico tra le partizioni per evitare la contaminazione incrociata causata da fattori umani. Indossare cappotti da laboratorio e guanti in lattice durante l'esperimento, e utilizzare strumenti separati in diverse aree. Cambia guanti e cappotti da laboratorio secondo necessità. Dopo la PCR, Non aprire immediatamente i coperchi. Attendere il raffreddamento sufficiente prima di aprire per il campionamento per ridurre al minimo la contaminazione dell'aerosol.
2）Thaw the reagents completely before use, ma evita di congelare e scongelare ripetuti. Seguire le istruzioni rigorosamente per la preparazione del reagente, Aggiunta del campione, e altri passaggi. Il banco di lavoro, centrifuga, Pipette, e altri strumenti dovrebbero essere regolarmente disinfettati usando disinfettanti contenenti cloro, etanolo, Agenti di rimozione della contaminazione dell'acido nucleico, o lampade ultraviolette.
3）A negative result does not necessarily mean a male. Mutazioni sconosciute, scarsa qualità del campione, bassa concentrazione, o la presenza di forti sostanze inibitorie nell'estrazione dell'acido nucleico (Test) può anche portare a “negativo” risultati. Questo kit viene utilizzato solo per l'amplificazione specifica del gene CHD-W nei pappagalli. Per altri prodotti, Si prega di consultare il produttore.
4）This product is for single use only. Non congelare ripetutamente e scongelare. È solo a scopo di ricerca scientifica e non dovrebbe essere utilizzato per la diagnosi clinica o altri scopi.
