Fosfatase Alkalin Jaringan dan Darah (AKP/ALP) Kit Uji Aktivitas
Catatan: Ambil dua atau tiga sampel berbeda untuk prediksi sebelum pengujian.
Peralatan Operasi: Spektrofotometer
Nomor Katalog: BC2140
Ukuran: 50T/24S
Komponen:
Reagen ekstraksi: Cairan 30 botol ml × 1, penyimpanan pada suhu 4℃.
Reagen 1: Cairan 10 botol ml × 1, penyimpanan pada 4 ℃ dan lindungi dari cahaya.
Reagen 2: Cairan 10 botol ml × 1, penyimpanan pada 4 ℃ dan lindungi dari cahaya.
Reagen 3: Cairan 30 botol ml × 1, penyimpanan pada 4 ℃ dan lindungi dari cahaya. Itu tidak dapat digunakan jika berubah menjadi biru-hijau.
Standar: Cairan 1 botol ml × 1, 10 Larutan standar μmol/ml fenol, penyimpanan pada suhu 4℃. Encerkan dengan air suling ke 2.5 μmol/ml sebelum digunakan.
Deskripsi Produk:
AKP/ALP adalah glikoprotease yang mengandung seng, Hidrolisis yang berbagai senyawa monoester fosfolipid alami dan sintetis dalam kondisi alkali. AKP / ALP didistribusikan secara luas di organ manusia, terutama di hati.
Dalam kondisi alkali, AKP/ALP mengkatalisasi hidrolisis disodium fenil fosfat menjadi fenol, dan fenol bereaksi dengan 4-aminoantipline dan kalium ferricyanide untuk membentuk turunan kuinon merah, yang dapat dideteksi absorbansi di 510 nm. Aktivitas AKP/ALP dapat dihitung dengan mengukur laju peningkatan absorbansi pada 510 nm.
Reagen dan Peralatan Diperlukan tetapi Tidak Disediakan:
Spektrofotometer, mesin sentrifugal meja, TransferPettor, 1 mL kuvet kaca, es dan air suling.
Prosedur:
SAYA. Enzim persiapan:
Menambahkan 1 reagen ekstraksi ml 0.1 g tisu, menggiling dengan seksama. Centrifuge pada 4 ℃, 10000 rpm untuk 10 menit. Ambil supernatan di atas es untuk diuji. Sampel darah dapat dideteksi secara langsung. Encerkan dengan reagen ekstraksi jika konsentrat tinggi.
II. Tekad prosedur:
- Panaskan spektrofotometer untuk 30 menit, sesuaikan panjang gelombangnya 510 nm, Atur penghitung ke nol dengan suling
- Tambahkan reagen di 1.5 Cuvette ML sebagai berikut:
Nama reagen (μL) | Uji tabung A3 | Tabung kontrol A4 | Tabung kosong A2 | Tabung standar A1 |
Air sulingan | 20 | |||
Solusi standar | 20 | |||
Supernatan | 20 | |||
Reagen 1 | 200 | 200 | 200 | 200 |
Reagen 2 | 200 | 200 | 200 | 200 |
Aduk rata, tetap di 37 ℃ untuk 15 menit. | ||||
Reagen 3 | 600 | 600 | 600 | 600 |
Supernatan | 20 | |||
Aduk rata, Mendeteksi absorbansi di 510 nm, merekam sebagai A1, A2, A3, A4. |
AKU AKU AKU. Perhitungan aktivitas AKP/ALP:
- Konsentrasi protein:
Definisi satuan: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi generasi 1 fenol μmol dalam sistem reaksi per menit pada 37 ℃ setiap mg protein.
AKP/ALP (U/mg keuntungan) =[C ×(A3-A4)−(A1-A2)× vs.]−(Cpr×Vs)÷ t = 0,167 ×(A3-A4)−(A1-A2)−Cpr
- Berat sampel:
Definisi satuan: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi generasi 1 fenol μmol dalam sistem reaksi per menit pada 37 ℃ setiap g sampel.
AKP/ALP (berat U/g) =[C ×(A3-A4)−(A1-A2)× vs.]−(W ÷ ve × vs.)÷ t = 0,167 ×(A3-A4)−(A1-A2)−W
- Darah:
Definisi satuan: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi generasi 1 fenol μmol dalam sistem reaksi per menit pada 37 ℃ setiap ml serum.
AKP/ALP (U/mL) =[C ×(A3-A4)−(A1-A2)× vs.]÷ vs ÷ t = 0,167 ×(A3-A4)−(A1-A2)
C: Konsentrasi standar, 2.5 mol/mL;
Tali: Volume reaksi total, 1020 μl = 1,02 ml; Vs: Volume supernatan, 0.02 ml;
Ve: Volume ekstraksi, 1 ml; W: Berat sampel, G;
T: Waktu reaksi, 15 menit;
Cpr: Konsentrasi protein sampel, mg/mL.
Catatan:
- Reagen 1, Reagen 2 dan reagen 3 harus dilindungi dari
- Reagen 3 tidak dapat digunakan jika telah berubah menjadi toblue-green.
- Campur dengan cepat setelah menambahkan reagen 3 untuk menghindari tidak lengkap
Contoh eksperimental:
- Ambil 0,1g pankreas tikus dan tambahkan 1 ML larutan ekstrak untuk homogenat. Setelah mengambil supernatan, beroperasi sesuai dengan langkah penentuan. Hitung AT = 0.324, AC = 0.037, AB = 0.022, Sebagai = 0.677. Hitung aktivitas enzim sesuai dengan massa sampel: Aktivitas enzim AKP/ALP (massa U/g) = 0,167 ×(DI-AC)−(As-ab) ÷ W = 0,167 ×(0.324-0.037)−(0.677-0.022)÷ 0,1 = 0,732 u/g
- Setelah mengambil serum kelinci, Pengoperasiannya dilakukan sesuai dengan langkah-langkah penentuan, dan aktivitas enzim dihitung sebagai berikut: At = 0.190, AC = 0.015, AB = 0.022, Sebagai = 0.677. Menurut volume darah, Aktivitas enzim dihitung sebagai berikut: Aktivitas enzim AKP/ALP (U/mL) = 0,167 ×(DI-AC) − (As-ab) = 0,167 ×(0.190-0.015)−(0.677-0.022)= 0,0446U/ml.
Produk-produk terkait:
BC2020/BC2025 Acetylcholinesterase(Sakit) Kit Uji Aktivitas
BC2130/BC2135 asam fosfatase(ACP) Kit Uji Aktivitas
BC0840/BC0845 carboxylesterase(Peduli) Kit Uji Aktivitas
Ulasan
Belum ada ulasan.