Solarbio Mengurangi Glutathione (GSH) Kit Pengujian Konten

Berkurangnya glutathione (GSH) Kit Pengujian Konten

Catatan: Ambil dua atau tiga sampel berbeda untuk prediksi sebelum pengujian.

Peralatan Operasi: Spectrophotometer/Microplate Reader

Nomor Katalog: BC1175

Ukuran: 100T/96S

Komponen:

Reagen I: 100 mL×1. Simpan pada suhu 4℃.

Reagen II: 20 mL×1. Simpan pada suhu 4℃.

Reagen III: 8 mL×1. Simpan pada suhu 4℃, Lindungi dari cahaya.

Standar: Bubuk 10 mg × 1. Simpan pada suhu 4℃, Lindungi dari cahaya.

Deskripsi Produk

Glutathione adalah tripeptida alami yang terdiri dari asam glutamat (Glu), sistein (Cys) dan glisin (Gly). Ini adalah semacam senyawa yang mengandung kelompok sulfhidril (-Sh), yang secara luas ada di jaringan hewan, jaringan tanaman, Mikroorganisme, dan ragi. Glutathione dapat bereaksi dengan 5,5′-ditittiobis-(2-Asam Nitrobenzoat) (Dtnb) untuk menghasilkan asam 2-nitro-5-mercaptobenzoic dan glutathione disulfide (GSSG). 2-asam nitro-5-mercaptobenzoic adalah produk kuning, dengan penyerapan maksimum di 412 nm.

Spesifikasi teknis

Batas deteksi minimum：3.763 μg/ml

Rentang linier：12.5-400 μg/ml

Reagen dan Peralatan Diperlukan tetapi Tidak Disediakan

Keseimbangan analitik, mortir/homogenizer, sentrifuge suhu rendah, mandi air, pipet yang dapat disesuaikan, Spectrophotometer/Microplate Reader, cuvette kaca mikro atau 96 Piring alas rata dan air suling dengan baik.

Prosedur

SAYA. Persiapan sampel

1. Sampel jaringan

Cuci jaringan segar dengan PBS untuk dua kali, lalu tambahkan 0.1 g jaringan hewan/tumbuhan menjadi homogenizer (Homogenizer telah dibilas dengan reagen I dan ditempatkan di atas es sebelum digunakan). Menambahkan 1 mL Reagen I (Proporsi jaringan dan reagen dapat tetap konstan), sepenuhnya digiling di atas es (Menggunakan nitrogen cair akan memiliki efek penggilingan yang lebih baik). Sentrifugasi di 8000 ×g untuk 10 menit pada 4 ℃, Ambil supernatan dan tempatkan di 4 ℃ untuk tes. (Jika tes tidak dapat diselesaikan sementara, Supernatan dapat disimpan di -80 ℃ untuk 10 hari -hari)

2. Contoh darah

Plasma: Sampel disentrifugasi 600 ×g untuk 10 menit pada 4 ℃. Menyerap plasma atas ke dalam tabung lain dengan menambahkan reagen volume yang sama i. Sentrifugasi di 8000 ×g untuk 10 menit pada 4 ℃, Ambil supernatan dan tempatkan di 4 ℃ untuk tes. (Jika tes tidak dapat diselesaikan sementara, Supernatan dapat disimpan di -80 ℃ untuk 10 hari -hari)

Sel darah: Sampel disentrifugasi 600 ×g untuk 10 menit pada 4 ℃. Membuang plasma atas, Cuci dengan volume PBS tiga kali untuk 3 waktu (menangguhkan kembali sel darah dengan PBS, sentrifugasi di 600 ×g untuk 10 menit), Tambahkan volume reagen yang sama i. Setelah dicampur, itu ditempatkan pada 4 ℃ untuk 10 menit. Sentrifugasi di 8000 ×g untuk 10 menit, Ambil supernatan dan tempatkan di 4 ℃ untuk tes. (Jika tes tidak dapat diselesaikan sementara, Supernatan dapat disimpan di -80 ℃ untuk 10 hari -hari)

3. Sel mencicipi

Sel panen tidak boleh kurang dari 106, lalu mencuci dengan PBS untuk dua kali (TUSUL kembali sel dengan PBS, sentrifugasi di 600 ×g untuk 10 menit). Volume reagen yang saya tambahkan adalah tiga kali volume presipitasi sel untuk menangguhkan kembali sel. Pembekuan dan pencairan berulang 2–3 kali (Disarankan bahwa dibekukan dalam nitrogen cair, Dilarahkan dalam 37 ℃ Air Bath). Sentrifugasi di 8000 ×g untuk 10 menit, Ambil supernatan dan tempatkan di 4 ℃ untuk tes. (Jika tes tidak dapat diselesaikan sementara, Supernatan dapat disimpan di -80 ℃ untuk 10 hari -hari)

II. Prosedur

1. Pemanasan lebih cepat spektrofotometer/pembaca mikro untuk 30 menit, sesuaikan panjang gelombangnya 412 nm, atur nol dengan sulingan
2. Preheat Reagent II dalam 37 ℃ (sel mamalia) atau 25℃ (spesies lain) mandi air untuk 30
3. Penentuan tabung kosong: Ambil Cuvette Kaca Mikro, menambahkan 20 μL air suling, 140 μl reagen II, 40 μl reagen III pada gilirannya, campur dengan baik, tempat 2 menit, dan mengukur 412 NM Absorbansi AB.
4. Membuat kurva standar

Menimbang 1 mg standar dan larut dengan 1 ml air suling untuk mendapatkan konsentrasi 1 mg/mL. Ambil solusi yang tepat untuk menyiapkan standar dengan konsentrasi 200 μg/ml, 100 μg/ml, 50 μg/ml, 25 μg/ml dan 12.5 μg/ml (Reagen encer I sepuluh kali sebelum mengencerkan larutan standar).

Ambil a 1.5 tabung EP ML dan tambahkan 20 μl standar, 140 μl reagen II dan 40 μl reagen III pada gilirannya. Setelah setiap tabung dicampur secara merata, diizinkan untuk berdiri 2 menit. Ukur serapannya pada 412 nm, dan absorbansi dikurangi ab sebagai absissa. Membuat kurva standar sesuai dengan absorbansi (X) dan konsentrasi (kamu, μg/ml).

5. Tes Tabung Sampel: Ambil Cuvette Kaca Mikro, menambahkan 20 μl sampel, 140 μl reagen II, 40 μl reagen III pada gilirannya, campur dengan baik, dan kemudian berdiri 2 menit untuk menguji atat absorbansi 412 nm, ΔA = at – AB.
6. Pengoperasian pembaca mikro sama dengan spektrofotometer, dan operasinya secepat

AKU AKU AKU. Perhitungan

Menurut kurva standar, ambil sampel Δa ke dalam rumus(X), dan menghitung konsentrasi sampel y (μg/ml).

• Konsentrasi protein

GSH (μg/mg prot)= Y × VRV ÷ VRV ÷ CPR = Y ÷ CPR

• Berat sampel

GSH (μg/g)= Y × VRV ÷(VRV ÷ VSV × W.)= y ÷ w

• Jumlah sel

GSH (μg/104Cell)= Y × VRV ÷(VRV ÷ VSV × N.)= y ÷ n

• Volume Solusi GSH (μg/ml)= 2y

N: Jumlah sel, 106;

VSV: Total volume supernatan, 1 ml；

Tali: Volume supernatan ditambahkan ke dalam sistem reaksi, 20 μl = 0,02 mL； W: Berat sampel, G;

Cpr: Konsentrasi protein supernatan, mg/mL.

2: Volume plasma (sel darah) diencerkan satu kali.

Catatan:

1. Sampel harus dihomogenisasi sepenuhnya. Jika tes tidak dapat diselesaikan sementara, itu dapat disimpan di-80 ℃.
2. Standar: Berkurangnya glutathione disiapkan saat larutan akan
3. Jika konten GSH dalam sampel tidak pasti, Encerkan sampel untuk beberapa gradien sebelumnya
4. Karena reagen saya mengandung precipitant protein, Supernatan tidak dapat digunakan untuk penentuan konsentrasi protein. Jika kandungan protein perlu ditentukan, Ambil jaringan lain.

Referensi:

• Alpert A J., Gilbert H f. Deteksi glutathione yang teroksidasi dan berkurang dengan reaksi pasca kolom daur ulang[J]. Biokimia analitik, 1985, 144(2):553-562.
• Owens C W I, Belcher R V.. Metode mikro kolorimetri untuk penentuan glutathione[J]. Jurnal Biokimia, 1965, 94(3):

Produk-produk terkait：

BC1180/ BC1185 Glutathione teroksidasi （GSSG） kit uji

BC1190/ BC1195 Glutathione Peroxidase Assay Kit

BC1150/ BC1155 teroksidasi thioredoxin reductase (Trxr) Perangkat Pengujian

BC1210/ BC1215 γ-Glutamate-Cysteine ​​ligase (Gcl) Uji ki