BCA (Asam Bicinchoninic) Protein Assay Kit adalah metode kolorimetri yang banyak digunakan untuk mengukur konsentrasi protein dalam sampel. Pengujian ini bergantung pada reduksi ion Cu^2+ menjadi Cu^1+ oleh protein dalam kondisi basa, membentuk kompleks berwarna ungu dengan asam bicinchoninic. Intensitas warna berbanding lurus dengan konsentrasi protein, memungkinkan kuantifikasi yang akurat.
Berikut adalah panduan langkah demi langkah tentang cara menggunakan a Protein BCA Perangkat Pengujian:
Bahan yang Dibutuhkan:
- Kit Uji Protein BCA
- Standar protein (albumin serum sapi umumnya digunakan)
- Sampel mengandung konsentrasi protein yang tidak diketahui
- Pelat mikro atau kuvet
- Mikropipet dan tip
- Pembaca pelat mikro atau spektrofotometer
- Air sulingan
Prosedur:
- Penyusunan Standar Protein:
- Siapkan serangkaian standar protein dengan konsentrasi yang diketahui. Standar-standar ini akan digunakan untuk membuat kurva standar untuk kuantifikasi. Konsentrasi yang umum adalah 0, 0.125, 0.25, 0.5, 0.75, Dan 1.0 mg/mL.
- Persiapan Sampel:
- Encerkan sampel protein Anda hingga konsentrasi yang sesuai dalam rentang linier pengujian. Jika diperlukan, Anda mungkin perlu melakukan pengenceran awal untuk memastikan sampel berada dalam kurva standar.
- Persiapan Reagen Kerja BCA:
- Campurkan Reagen BCA A dan Reagen BCA B dalam a 50:1 perbandingan (biasanya disediakan dalam kit). Pastikan pencampuran menyeluruh.
- Penambahan Standar dan Sampel:
- Pipet alikuot standar protein dan sampel ke dalam lubang terpisah pada lempeng mikro. Setiap standar dan sampel harus dijalankan dalam rangkap dua atau rangkap tiga.
- Penambahan Reagen Kerja BCA:
- Tambahkan Reagen Kerja BCA dengan volume yang sesuai ke setiap sumur yang berisi standar dan sampel. Aduk rata.
- Inkubasi:
- Inkubasi pelat mikro pada suhu yang sesuai (biasanya 37°C) untuk 30 menit agar reaksi warna dapat terjadi.
- Pengukuran:
- Ukur serapan masing-masing sumur pada 562 nm menggunakan microplate reader atau spektrofotometer.
- Pembuatan Kurva Standar:
- Plot nilai serapan standar terhadap konsentrasi yang diketahui untuk membuat kurva standar.
- Kuantifikasi Sampel:
- Gunakan kurva standar untuk menentukan konsentrasi protein sampel Anda berdasarkan serapannya.
- Analisis Data:
- Hitung konsentrasi protein dalam sampel berdasarkan kurva standar. Kebanyakan pembaca lempeng mikro mempunyai perangkat lunak yang dapat membantu dalam analisis ini.
Ulasan
Belum ada ulasan.