RNA Total Tanaman Polisakarida dan Polifenol (Plus) Kit Ekstraksi Kuantitas Kecil

1. Komponen kit reagen

Spesifikasi	50T	100T
Kucing. TIDAK.	SN0305AD	SN0306AD
Kolom ekstraksi RNA (mengatur)	50 (mengatur)	100 (mengatur)
Kolom pembersihan DNA (mengatur)	50 (mengatur)	100 (mengatur)
Ekstraksi RNA Buffer I	30 ml	2×30 ml
Buffer penghapusan inhibitor	30 ml	2×30 ml
Cuci Buffer 1	15 ml	2×15 ml
Penyangga Elusi	20 ml	20 ml
Instruksi manual	1	1

 

2. Penyimpanan

This reagent kit can be stored at room temperature (15-25℃) di lingkungan yang kering dan stabil untuk 12 bulan.

3. Petunjuk Penggunaan Kit Reagen

3.1 Kit ini ditujukan untuk tujuan penelitian biologi molekuler dan tidak boleh digunakan untuk diagnosis atau pengobatan penyakit.

3.2 Beberapa komponen dalam kit mengandung bahan pengiritasi; disarankan untuk mengambil tindakan pencegahan yang diperlukan (seperti memakai pakaian pelindung dan kacamata).

3.3 Penggunaan kit ini memerlukan peralatan tambahan seperti centrifuge berkecepatan tinggi, mandi air (mandi logam), pencampur pusaran, etanol anhidrat, nitrogen cair, khloroform, air deionisasi steril, dan tabung EP.

4. Pengantar Kit Reagen

This RNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying polysaccharide and polyphenol plant total RNA, suitable for most polysaccharide and polyphenol-rich plant tissues. Umumnya, plant tissues rich in polysaccharides and polyphenols contain a high level of secondary phenolic metabolites and polysaccharides, significantly affecting RNA extraction efficiency. This kit can effectively remove polysaccharides and polyphenols, as well as efficiently eliminate DNA contamination from samples. If the experiment is sensitive to DNA, it is recommended to use primers spanning introns for downstream experiments.

The RNA Fast Purification Kit can extract total RNA from plant tissues (termasuk RNA nuklir dan RNA sitoplasma) di dalam 1 jam. RNA yang diekstraksi dapat langsung digunakan untuk RT-PCR, Northern blotting, dll.. Seluruh proses pemurnian tidak memerlukan reagen beracun seperti fenol-kloroform, making this RNA purification kit suitable for various other sample types.

5. Prinsip dan Prosedur Eksperimental

6. Proses Ekstraksi

Tindakan pencegahan sebelum memulai percobaan:

A. Sebelum menggunakan Cuci Buffer 1, add the specified amount of absolute ethanol according to the label on the reagent bottle, dan centang kotak pada label untuk menunjukkan bahwa etanol absolut telah ditambahkan.

B. Buffer Elusi adalah a 0.1x solusi TE mengandung minimal EDTA. Jika EDTA mempengaruhi percobaan selanjutnya, disarankan untuk mengganti buffer elusi dengan air deionisasi steril.

1. Pemrosesan Sampel:

A. Pengumpulan dan Penyimpanan Bahan:

Jika bahan segar tidak dapat digunakan segera, Tempatkan mereka dalam nitrogen cair dan simpan di -80 ° C.

B. Whenever possible, collect fresh materials, as they contain fewer polysaccharides and polyphenols.

2. Grind approximately 100 mg of fresh samples or not more than 20 mg bahan kering menggunakan nitrogen cair.

3. Menambahkan 600μl RNA Extraction Buffer I, ensuring there are no blocky tissues in the ground sample. Blocky tissues are difficult to lyse and can reduce RNA yield.

4. Vortex untuk 30 detik.

5. Sentrifugasi lisat untuk 5 menit pada 12,000 rpm.

(Catatan: Polysaccharide plant materials may produce a lot of sticky substances at this step, which can shear RNA in subsequent steps. Karena itu, remove these substances during this step.)

6. Transfer the supernatant obtained in the previous step to a DNA Clear Purification Column, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, and collect the filtrate (Catatan: RNA is present in the filtrate).
7. Menambahkan 250μl etanol absolut, campur dengan cara dipipet. If there is a small amount of precipitation, it does not affect subsequent experiments. Add the liquid to the RNA purification column, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, and discard the flow-through.
8. Menambahkan 700buffer penghapusan penghambat μl ke kolom pemurnian RNA, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, and discard the flow-through.
9. Menambahkan 700μl buffer cuci 1 ke kolom pemurnian RNA, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, and discard the flow-through.
10. Menambahkan 500μl buffer cuci 1 ke kolom pemurnian RNA, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 3 menit, and discard the flow-through.
11. Place the RNA purification column into a new 1.5ml centrifuge tube, air-dry the membrane at room temperature for 2 menit.

(Catatan: Konfirmasikan penambahan etanol ke buffer cuci 1. The presence of ethanol significantly affects subsequent experiments. Karena itu, pengeringan membran sangat penting. Setelah sentrifugasi, ensure the absence of ethanol before elution. Buang sampah dan tabung pengumpul. Setelah menggunakan buffer cuci 1, Membran pada kolom pemurnian RNA hanya boleh memiliki sedikit warna. Lepaskan kolom pemurnian RNA dengan hati -hati setelah sentrifugasi, memastikan tidak menyentuh tabung koleksi untuk menghindari kontaminasi etanol.)

12. Menetes 50-100μl buffer elusi ke membran, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 1 menit, and collect the RNA solution.

(Catatan: Eluting RNA with 50μl Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)