Virus Herpes Merpati (PiHV) Alat Uji Asam Nukleat (UNG, Metode Pemeriksaan Fluoresen PCR)

Nomor Barang: AP2409002 Spesifikasi: 50T/100T Penyimpanan: -20℃

Perkenalan produk:

Virus Herpes Merpati (PiHV) adalah penyakit menular virus yang terutama menyerang merpati muda yang disebabkan oleh Jenis Virus Herpes Merpati 1 (PiHV1). Ini adalah patogen penting yang menyebabkan sindrom penyakit merpati squab pada merpati muda. Secara klinis, hal ini ditandai dengan gejala seperti peradangan hidung dan konjungtiva. Merpati yang terinfeksi juga mungkin menunjukkan depresi, penurunan nafsu makan, diare, muntah, dan gejala neurologis. Karena itu, lebih awal, cepat, dan deteksi PiHV yang mudah sangat penting untuk diagnosis, memperlambat penyebaran penyakit, dan mencegah komplikasi. Alat tes ini dirancang berdasarkan urutan yang dilestarikan dalam gen PiHV, dengan kondisi optimal, memungkinkan kuantitatif fluoresen yang akurat PCR pengujian lisan, penyeka kloaka, darah, dan sampel jaringan lain dari burung. Hal ini memungkinkan penentuan cepat apakah inang terinfeksi PiHV.

Isi produk:

Komponen reagen	AN2409002-02 (50T)	AN2409002-03 (100T)
Reagen Pengujian PiHV	1150μL	1150μL× 2
Kontrol Positif PiHV	100μL	100μL
Kontrol Negatif	100μL	100μL

Kondisi penyimpanan:

Simpan pada suhu -20℃, umur simpan setidaknya 12 bulan.

Operasi eksperimental:

1. Persiapan Sampel (Area Persiapan Sampel)

1.1 Persyaratan Sampel:

-Swab Lisan/Klokal: Gunakan kapas steril untuk dimasukkan ke tenggorokan atau kloaka burung, berputar tiga kali. Keluarkan dan masukkan ke dalam tabung centrifuge, memotong bagian yang terbuka, kemudian tutup tabung dengan rapat dan beri label. Sampel yang dapat diuji di dalamnya 24 jam dapat disimpan pada suhu 2-8°C; sampel yang tidak dapat segera diuji harus disimpan pada suhu -20°C.

-Darah Utuh: Gunakan EDTA sebagai antikoagulan; jangan gunakan heparin. Diperlukan darah utuh yang segar, atau dapat disimpan pada suhu 2-8°C tidak lebih dari 7 hari, atau pada suhu -20°C tidak lebih dari 3 bulan. Siklus pembekuan-pencairan yang berulang harus dihindari sebisa mungkin.

-Jaringan: Ambil jaringan hati segar jangan melebihi 100 mg, dan siapkan homogenat jaringan menggunakan 200-500μL air steril untuk persiapan sampel selanjutnya.

1.2 Persiapan Sampel:

Lihat Sanshibio's “Kit Ekstraksi Cepat DNA Genom Hewan (untuk Analisis PCR) petunjuk” (Nomor Katalog.: DP202), atau perangkat/metode ekstraksi asam nukleat lainnya yang memenuhi persyaratan yang relevan, untuk mengekstrak asam nukleat dari sampel yang diproses. Sampel asam nukleat yang diekstraksi harus ditempatkan dalam kotak es dan diuji sesegera mungkin; mereka dapat disimpan pada suhu 4°C tidak lebih dari 7 hari atau pada suhu -20°C tidak lebih dari 6 bulan.

2. Siapkan Sistem Reaksi (Contoh Area Penambahan)

2.1 Keluarkan setiap komponen kit, benar-benar mencair pada suhu kamar, dan sentrifugasi untuk 10 detik untuk mengumpulkan cairan dari dinding tabung dan tutup di bagian bawah. Siapkan sistem reaksi sesuai dengan jumlah sampel (n+2) (yaitu, n sampel uji + 1 kontrol positif + 1 kontrol negatif). Secara khusus, mempersiapkan (n+2) tabung PCR, mengeluarkan 23μL Reagen Pengujian PiHV ke dalam setiap tabung, dan simpan di dalam kotak es untuk digunakan nanti.

2.2 Kemudian, secara berurutan tambahkan 2μL Kontrol Negatif, sampel asam nukleat yang diekstraksi, dan Kontrol Positif PiHV pada reagen pengujian. Tutup tabung dengan rapat dan catat informasinya; volume total untuk setiap reaksi harus 25μL. Aduk rata, mesin sentrifugal untuk 10 detik, dan melakukan percobaan amplifikasi pada instrumen PCR.

3. Amplifikasi PCR (Area Amplifikasi dan Analisis Produk)

50°C dekontaminasi enzim UNG untuk 2 menit; 95°C pra-denaturasi untuk 2 menit; 95Denaturasi °C untuk 10 detik, diikuti dengan anil dan ekstensi 60°C 35 detik, untuk 40 siklus, mengumpulkan sinyal fluoresensi pada 60°C. Pilih saluran fluoresensi FAM (jika menggunakan seri ABI atau instrumen PCR kuantitatif real-time serupa, hubungi produsen terlebih dahulu jika diperlukan atau tambahkan sendiri pewarna kalibrasi ROX; jika tidak, ikuti prosedur normal).

4. Penentuan Hasil

4.1 Ketentuan untuk Memvalidasi Hasil Eksperimen:

Nilai Ct saluran FAM kontrol positif < 28 dan memamerkan sebuah “S” kurva amplifikasi berbentuk; kontrol negatif tidak mempunyai nilai Ct atau nilai Ct ≥ 38 dan tidak “S” kurva amplifikasi berbentuk, menunjukkan hasil yang valid; jika tidak, ulangi percobaannya. Jika pengujian ulang tetap tidak valid, silakan hubungi personel teknis pabrikan.

4.2 Penentuan Hasil Sampel:

Nilai Ct ≤ 33 dan memamerkan sebuah “S” kurva amplifikasi berbentuk, dinilai sebagai PiHV positif;

nilai Ct 33 < Kt < 38 dianggap mencurigakan; pengujian ulang dianjurkan (ekstraksi asam nukleat mungkin di bawah standar atau terdapat kontaminan penghambat yang kuat (misalnya, residu dari disinfektan, antikoagulan) menghambat amplifikasi; menyarankan pemrosesan ulang sampel untuk ekstraksi dan amplifikasi asam nukleat; pertama-tama singkirkan hasil positif palsu yang disebabkan oleh kontaminasi aerosol sebelum mengekstraksi ulang asam nukleat dan menguji ulang). Jika kontaminasi aerosol dikesampingkan dan saluran FAM menguji ulang nilai Ct < 33 dengan kurva amplifikasi yang jelas, itu ditentukan sebagai PiHV positif; jika tidak, itu ditentukan sebagai negatif;

Tidak ada nilai Ct atau nilai Ct ≥ 38 dan tidak “S” kurva amplifikasi berbentuk ditentukan sebagai PiHV negatif.

Tindakan pencegahan:

• Untuk mencegah kontaminasi, percobaan harus dipartisi secara ketat, dan isolasi fisik antar partisi diutamakan untuk menghindari kontaminasi silang akibat faktor manusia. Kenakan jas lab dan sarung tangan lateks selama percobaan, menggunakan alat secara mandiri di berbagai bidang, mengganti sarung tangan dan jas lab bila diperlukan. Setelah PCR, jangan langsung membuka tutupnya; buka setelah pendinginan yang cukup untuk meminimalkan kontaminasi aerosol.
• Cairkan reagen sepenuhnya sebelum digunakan, tetapi hindari siklus pembekuan-pencairan yang berulang. Tabung reaksi PCR yang disediakan dalam kit berukuran 0,2mL; jika penggantian diperlukan, transfer setelah pencairan lengkap. Ikuti dengan ketat petunjuk untuk persiapan reagen dan penambahan sampel. Stasiun Kerja, sentrifugal, pipet, dan instrumen lainnya harus didesinfeksi secara teratur dengan disinfektan yang mengandung klorin, alkohol, agen dekontaminasi asam nukleat, atau sinar UV.
• Hasil negatif belum tentu berarti inangnya tidak terinfeksi virus. Kualitas sampel buruk, beban virus yang rendah, atau adanya zat penghambat yang kuat (seperti alkohol, desinfektan, antikoagulan, dll.) dapat menyebabkan kegagalan ekstraksi asam nukleat (deteksi) dan sebuah “negatif” hasil. Ikuti kriteria interpretasi hasil, dan ketika ada hasil yang mencurigakan, pertama-tama singkirkan kontaminasi aerosol. Jika ada pertanyaan lain, hubungi personel teknis pabrikan.
• Produk ini hanya untuk sekali pakai. Komponen dalam reagen sensitif terhadap cahaya alami; hindari paparan cahaya selama pengemasan dan penyimpanan. Setelah pengemasan, jangan berulang kali dibekukan-dicairkan. Untuk penggunaan penelitian ilmiah saja; bukan untuk diagnosis klinis atau tujuan lain.