Kit Ekstraksi DNA Jaringan yang tertanam parafin

1. Komponen kit reagen

Spesifikasi	50T	100T
Kucing. TIDAK.	SN0251	SN0252
Kolom Ekstraksi DNA (mengatur)	50 (mengatur)	100 (mengatur)
Buffer Reagen IV	20 ml	2 × 20 ml
Buffer Reagen C	30 ml	2 × 30ml
Reagent Buffer FF	60 ml	2 × 60ml
Cuci Buffer 1	15 ml	2 × 15 ml
Penyangga Elusi	20 ml	20 ml
Proteinase K	1ml	2x1ml
RNaseA	1ml	2x1ml
Instruksi manual	1	1

2. Penyimpanan

Kit reagen ini harus disimpan pada suhu kamar (15-25℃) dan dalam kondisi kering, dengan umur simpan 12 bulan. Kolom pemurnian ekstraksi DNA dapat disimpan 1 tahun di lingkungan sejuk dan kering. Proteinase K dan RNase A mengandung bahan pengawet, memungkinkan transportasi pada suhu kamar, tapi untuk penyimpanan jangka panjang, mereka harus disimpan pada -20℃.

3. Petunjuk Penggunaan Kit Reagen

3.1 Kit reagen ini ditujukan untuk penelitian biologi molekuler dan tidak boleh digunakan untuk diagnosis atau pengobatan penyakit.

3.2 Beberapa komponen dalam kit reagen mengandung bahan iritan. Tindakan perlindungan seperti mengenakan pakaian pelindung dan kacamata direkomendasikan.

3.3 Selama penggunaan kit reagen ini, mesin sentrifugal berkecepatan tinggi, mandi air (mandi logam), pencampur pusaran, etanol anhidrat, air deionisasi steril, dan tabung EP perlu disiapkan oleh pengguna.

4. Pengantar Kit Reagen

 

Paraffin-embedded tissue pemurnian DNA kit provides a rapid and effective DNA purification solution for samples in paraffin sections. Tissues are collected after paraffin dissolution using a dedicated dewaxing solution, and sample DNA is obtained through subsequent extraction processes.

 

This kit can extract sample DNA from paraffin sections within 30 menit, and the entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform. DNA yang diekstraksi dapat langsung digunakan untuk PCR, Blot Selatan, dan aplikasi lainnya.

5. Prinsip dan Prosedur Eksperimental

6. Proses Ekstraksi

Sebelum Memulai Eksperimen:

A. Reagent Buffer FF:This buffer should be stored long-term in an environment between 2°C and 8°C.

B. Reagent Buffers IV and C dapat mengendap pada kondisi suhu rendah. Disarankan untuk memanaskan pada suhu 65°C 5 menit. Setelah endapan larut, the solution can be used normally.

C. MencuciPenyangga 1 should have a specified amount of anhydrous ethanol added before use, seperti yang ditunjukkan pada label botol reagen. Check the label with a tick mark to indicate the addition of anhydrous ethanol.

D. Buffer Elusi adalah a 0.1x solusi TE with a minimal amount of EDTA. Jika EDTA mempengaruhi percobaan selanjutnya, it is advisable to replace the elution buffer with sterile deionized water.

 

1. Pemrosesan Sampel:

Select 5-10 paraffin sections (1mm-3mm thickness), use scissors to remove excess wax, and cut the embedded tissue sample into small pieces. Place them in a 1.5ml centrifuge tube, menambahkan 800μl Reagent Buffer FF, incubate at 75°C for 5 minutes until all paraffin is dissolved. Centrifuge pada 12000rpm untuk 5 menit, buang supernatannya.

2. Menambahkan 400μl Reagent Buffer IV, 20μl Proteinase K (10 mg/ml), and 10μl RNaseA (10 mg/ml) to the precipitate from the previous step. Digest at 65°C, stirring every 6-7 kali sampai pencernaan selesai.
3. Tambahkan volume yang sama Buffer Reagen CDan an equal volume of anhydrous ethanol, Campur dengan teliti dengan pipetting.

(Misalnya: If you add 400μl Reagent Buffer IV, approximately add 430μl Reagent Buffer C and 430μl anhydrous ethanol. Some precipitation may occur after adding Reagent Buffer C, but it does not affect subsequent experiments.)

4. Tambahkan cairan yang diperoleh ke kolom pemurnian ekstraksi DNA (or cartridge) (sekitar 650-700μl setiap kali), let it stand at room temperature for 2 menit, centrifuge at over 8,000rpm for 1 menit. Buang limbah yang dikumpulkan dan memasukkan kembali tabung pengumpulan ke kolom pemurnian untuk langkah berikutnya.
5. Ulangi langkah 4, adding the remaining liquid to the DNA extraction purification column (or cartridge), centrifuge at over 8,000rpm for 1 menit, Buang limbah dan tabung pengumpulan.
6. Tempatkan kolom pemurnian ekstraksi DNA (or cartridge) ke dalam tabung koleksi, menambahkan 300μl MencuciPenyangga 1, centrifuge at over 8,000rpm for 1 menit. Discard the waste and reinsert the purification column into the tube for the next step.

(Catatan: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Mencuci Penyangga 1.)

7. Menambahkan 500μl MencuciPenyangga 1 ke kolom pemurnian ekstraksi DNA (or cartridge), centrifuge at 14,000rpm (20000×g) untuk 2 menit. Extend centrifugation time if needed for a dryer membrane.
8. Tempatkan kolom pemurnian ekstraksi DNA (or cartridge) dalam tabung sentrifugasi yang baru, Buka tutupnya, incubate at 65°C for 2 menit. Extend this step if necessary to evaporate ethanol to prevent residual ethanol from affecting downstream experiments.
9. Suspend the addition of 50-100μl buffer elusi to the membrane, centrifuge at 12,000rpm for 2 menit.

(Catatan: 1. Using 50μl Elution Buffer for DNA elution can increase DNA concentration but decreases total DNA yield. 2. DNA yang dielusi dapat diterapkan kembali ke kolom pemurnian ekstraksi DNA, centrifuged at 12000rpm for 2 minutes again to increase DNA yield.)