Solarbio superoksid dismutaza (TRAVNJAK) Kit za ispitivanje aktivnosti

Superoksid dismutaza (TRAVNJAK) Kit za ispitivanje aktivnosti

Bilješka: Potrebno je predvidjeti 2-3 Uzorci velike razlike prije formalnog određivanja.

Operativna oprema: Spektrofotometar

Mačka ne: BC0170

Veličina: 50T/24s

Komponente:

Ekstrakcijski reagens: 60 ml × 1. Skladištenje na 4 ℃.

Reagens ⅰ: 15 ml × 1. Skladištenje na 4 ℃.

Reagens ⅱ: 160 μl × 1. Skladištenje na 4 ℃. Pomiješajte piptiranje nakon centrifugiranja.

Reagens ⅲ: 11 ml × 1. Skladištenje na 4 ℃.

Reagens ⅳ: Prah × 1. Skladištenje na 4 ℃.

Reagens v: 2 ml × 1. Skladištenje na 4 ℃. Dodajte reagens ⅳ u reagens V prije upotrebe i protresite oscilatorom da biste se temeljito miješali. Može se pohraniti 3 mjeseca.

Opis proizvoda:

Superoksid dismutaza (TRAVNJAK, EC 1.15.1.1) široko se nalazi kod životinja, biljke, mikroorganizmi i kultivirane stanice. Katalizira superoksidni anion da tvori H2O2 i O2. SOD nije samo enzim za čišćenje superoksida aniona, ali i glavni enzim koji proizvodi H2O2, koji igra važnu ulogu u biološkom antioksidacijskom sustavu.

Superoksid anion (O2-) proizvodi se reakcijskim sustavom ksantina i ksantina oksidaze. O2- može smanjiti plavi tetrazol kako bi stvorio plavi formazan, koja ima apsorbanciju u 560 NM. Sod može ukloniti o2- i inhibira stvaranje metionina. Tamnija je plava boja reakcijske otopine, što je niža aktivnost SOD -a. Upaljač plava boja reakcijske otopine, Što je veća aktivnost SOD -a.

Potrebni reagensi i oprema, ali nisu pruženi:

Spektrofotometar, stol centrifuga, PRIJENOS, 1 ML staklena kiveta, minobacač/homogenizator, led i destilirana voda.

Koraci operacije:

Ja. Priprema uzorka:

1. Bakterije ili stanice: prikupljanje bakterija ili stanica u epruvetu za centrifugu, odbaciti supernatant nakon centrifugiranja. Prema udjelu bakterija ili stanica (104 stanice): volumen otopine za ekstrakciju (ml) od 1:5-10 izdvojiti. Predlaže se da 5 Milijun bakterija ili stanica količine s 1 ml reagensa za ekstrakciju. Dijeljenje bakterija ili stanica ultrazvukom (stavljen na led, ultrazvučna snaga 200w ili 20%, Radno vrijeme 3s, Interval 10s, ponoviti za 30 vrijeme). Centrifuga na 8000 × g za 10 minuta u 4 ℃ za uklanjanje netopljivih materijala, i prije testiranja uzmite supernatant na ledu.
2. Tkivo: Prema udjelu težine tkiva (g): volumen otopine za ekstrakciju (ml) od 1:5-10 izdvojiti. Predlaže se da 0.1 g tkiva s 1 ML reagensa za ekstrakciju i potpuno homogeniziran na ledu.
3. Centrifuga na, 8000 × g za 10 minuta u 4 ℃ za uklanjanje netopljivih materijala, i prije testiranja uzmite supernatant na ledu.
4. Serum (plazma) uzorak: detektirajte uzorak izravno.

Ii. Odlučnost postupak:

1. Zagrijte spektrofotometar za 30 minuta, prilagoditi valnu duljinu na 560 nm i postavite nulu s destiliranom vodom.
2. Držite reagens ⅰ, Reagens ⅲ, Reagens v u vodenoj kupelji za više od 5 minuta u 37 ℃(sisavac) ili

25℃ (Ostale vrste).

3. Dodajte reagense sa sljedećim popisom:

Reagens (μL)	Epruveta (T)	Kontrola (C)	Prazna cijev (B1)	Prazna cijev (B2)
Uzorak	90	90	–	–
Reagens ⅰ	240	240	240	240
Reagens ⅱ	6	–	6	–
Reagens ⅲ	180	180	180	180
Destilirana voda	480	486	570	576
Reagens v	30	30	30	30

Temeljito pomiješajte i smjesa se inkubira na sobnoj temperaturi za 30 minuta. Dodajte smjesu u 1 ml staklenu kivetu, i otkriti vrijednost apsorpcije svake cijevi na 560 NM. ΔAT = AT-AC，ΔAb = AB1-AB2. Ako na dnu postoje oborine, temeljito pomiješajte, a zatim izmjerite.

Iii. Izračunavanje:

1. Postotak inhibicije:

Postotak inhibicije =[ΔAb -ΔAT]÷ ΔAb × 100%

Postotak inhibicije trebao bi biti u 30%~ 70% (vrijednost blizu 50% imat će točniji rezultat). Ako je izračunati postotak inhibicije manji od 30% ili više od 70%, Obično je potrebno prilagoditi količinu dodavanja uzorka i ponovno odrediti. Ako je postotak inhibicije previsok, Uzorak treba pravilno razrijediti. Ako je postotak inhibicije prenizak, Uzorak treba biti predstavljen s većom koncentracijom.

2. Definicija jedinice: Jedna jedinica aktivnosti enzima definirana je kao količina enzima katalizira inhibiciju 50% U reakcijskom sustavu gore navedenog ksantina
3. Izračunavanje

A. Serum (plazma)uzorak

TRAVNJAK (U/ml)= =[P ÷(1-P)× vrv]÷ vs × f = 11,4 × p ÷(1-P)× F

B. Tkivo, Bakterije ili kultivirane stanice

a) Koncentracija proteina:

TRAVNJAK (U/ml Prot) = = [P ÷(1-P)× vrv]÷(VS × CPR)× f = 11,4 × p ÷(1-P)÷ cpr × f

b) Težina uzorka

TRAVNJAK (U/g težina) = = [P ÷(1-P)× vrv]÷(W × vs ÷ vsv)× f = 11,4 × p ÷(1-P)÷ w × f

c) Količina bakterija ili stanica

TRAVNJAK (U/104 ćelija)= =[P ÷(1-P)× vrv]÷(500× vs ÷ vsv)× f = 0,0228 × p ÷(1-P)× F

Vrpca: Ukupni volumen reakcije, 1.026 ml; Vs: Volumen uzorka, 0.09 ml;

VSV: Valum ekstrakcije, 1 ml;

CPR: Koncentracija proteina uzorka, mg/ml; W: Težina uzorka, g;

500: Ukupni broj bakterija i stanica, 5 milijun. P: Postotak inhibicije, %;

F: Razrjeđivanje uzorka višestruko.

Bilješka:

1. Uzorak i reagens ⅱ trebaju biti postavljeni na led kada
2. Kad ima mnogo uzoraka, Radno rješenje (uključujući reagens I, II i III) Može se konfigurirati prema tablici. Reagens v se mora dodati
3. Nakon završetka reakcije, Može se formirati oborine, što se može odrediti nakon

Eksperimentalni primjeri:

1. 1 G od Echinochloa crusgalli se dodaje u 1 ML reagensa za ekstrakciju za homogenizaciju. Nakon uzimanja supernatanta, Operacija se provodi prema koracima određivanja. Rezultati su pokazali da je ΔAT = AT – Ac = 0.335-0.012 = = 0.323, ΔAb = AB1 - AB2 = 0.957-0.003 = = 0.954. Postotak inhibicije = (Δab- Δat)÷ ΔAb × 100% = = 72%, a aktivnost enzima izračunava se prema masi uzorka.

Aktivnost sode (U/g masa) = = 11.4 × postotak inhibicije (1-Postotak inhibicije) × w = 293.14 U/g masa.

2. 1 ML reagensa za ekstrakciju se dodaje 0.1 g slezene štakora za homogenizaciju. Nakon uzimanja supernatanta, Operacija se provodi prema koracima određivanja. Rezultati su pokazali da je ΔAT = AT- Ac = 0.563-0.213 = = 0.35, ΔAb = AB1- Ab2 = 0.957-0.003 = = 0.954, postotak inhibicije = (ΔAb -ΔAT)÷ ΔAb × 100% = 31%

Aktivnost sode (U/g masa) = = 11.4 × postotak inhibicije (1-Postotak inhibicije) × w = 196.71 U/g masa.

3. 10 Milijun stanica se ekstrahira i centrifugira dodavanjem 1 ML reagensa za ekstrakciju, a zatim se operacija izvodi prema koracima određivanja. Rezultati su sljedeći: ΔAT = AT – Ac = 614-0.015 = 0.599, ΔAb = AB1- Ab2 = 0.944-0.005 = = 0.939, postotak inhibicije = (Δab- Δat) × ΔAb × 100% = = 36.21%

Aktivnost sode (U/104 ćelija) = Postotak inhibicije ÷ (1-Postotak inhibicije)× VTS]÷(1000× vs ÷ vts) = = 0.0065 U/104 ćelija.

Reference:

• Spitz D R, Oberley L W. Test za aktivnost superoksid dismutaze u homogenata tkiva sisavaca[J]. Analitička biokemija, 1989,179(1):8-18.
• Masayasu M, Hiroshi y. Pojednostavljena metoda ispitivanja superoksidne aktivnosti dismutaze za kliničku upotrebu[J]. Acta kemijska klinika, 1979,92(3):337-342.

Povezani proizvodi:

BC0190/BC0195 polifenol oksidaza (PPO) Kit za ispitivanje aktivnosti

BC0210/BC0215 Fenilalninski amonialaza (Šal) Kit za ispitivanje aktivnosti

BC0200/BC0205 Katalaza (MAČKA) Kit za ispitivanje aktivnosti

BC0090/BC0095 peroksidaza (Mahuna) Kit za ispitivanje aktivnosti