Solarbio Malondialdehyde (MDA) Komplet za ispitivanje sadržaja

Malondialdehyde (MDA) Komplet za ispitivanje sadržaja

Bilješka: Potrebno je predvidjeti 2-3 Uzorci velike razlike prije formalnog određivanja. Operativna oprema: Spektrofotometar.

Mačka ne: BC0020

Veličina: 50T/48s

Komponente:

Komponenta	Tip	Volumen/Količina	Skladištenje
Ekstrakcijski reagens	Tekućina	60 ml × 1	4°C
Reagens i	Tekućina	42 ml × 1	4°C
Reagens II	Puder	–	4°C
MDA radni reagens	Tekućina	20 mL reagensa I	4°C
		+ Reagens II
Reagens iii	Tekućina	12 ml × 1	4°C

Bilješka: Radnu otopinu za detekciju MDA teško je otopiti, koji se može zagrijati na 70 ℃ i snažno vibrirati kako bi se pospješilo otapanje. Ili ultrazvučnom obradom za poticanje otapanja.

Opis proizvoda:

• Lipidni peroksid nastaje interakcijom slobodnih radikala kisika s nezasićenim masnim kiselinama, na kraju stvarajući spojeve kao što je malondialdehid (MDA). Razina peroksidacije lipida služi kao pokazatelj, što se može procijeniti mjerenjem razine MDA.
• Pod kiselim i visokim temperaturama, smeđe-crveni spoj, 3,5,5-tri metil sulfametoksazol-2,4-dva ketona, sintetizira se reakcijom kondenzacije između MDA i tiobarbiturne kiseline (TBA). Ovaj spoj pokazuje maksimalnu apsorpciju na 532 NM. Procjena peroksidacije lipida uključuje kolorimetrijsku analizu. Međutim, prisutnost topivih šećera može ometati proces detekcije. Reakcija topivih šećera s TBA proizvodi reakciju boje s valnim duljinama apsorpcije na 450 nm i 532 NM. U ovom priboru za analizu, sadržaj MDA određen je varijancom apsorbancije pri 532 NM, 450 NM, i 600 NM.
• Zbog prisutnosti saharoze u biljnim tkivima i glukoze u životinjskim tkivima, komplet uključuje dvije računske formule prilagođene za saharozu i glukozu. Ove formule su prikladne za procjenu lipida.

Potrebni reagensi i oprema, ali nisu pruženi:

Spektrofotometar, vodena kupelji, stolna centrifuga, PRIJENOS,1 ML staklena kiveta, minobacač/homogenizator, led i destilirana voda.

Postupak:

Ja. Priprema uzorka:

Bakterije ili stanice:

Sakupite bakterije ili stanice u epruvetu centrifuge. 5 milijuni bakterija ili stanica mogu se pomiješati s 1 ML reagensa za ekstrakciju. Koristite ultrazvuk za razdvajanje bakterija i stanica (stavljen na led, ultrazvučna snaga 200W, ultrazvučno vrijeme 3 sekundi, interval 10 sekundi, ponoviti za 30 vrijeme). Centrifuga na 8000 × g za 10 minuta u 4 ℃ za uklanjanje netopljivih materijala, i uzmite supernatant na led prije testiranja.

Tkivo:

0.1 g tkiva moglo se miješati sa 1 mL reagensa za ekstrakciju i potpuno homogeniziran na ledenoj kupelji. Zatim centrifugirajte na 8000 × g za 10 minuta u 4 ℃ za uklanjanje netopljivih materijala, i prije testiranja uzmite supernatant na ledu.

Serum:

Otkriti

Ii. Odlučnost postupak:

1. Prethodno zagrijte spektrofotometar na više od 30 minuta, postaviti nulu s destiliranom
2. Dodajte reagense sa sljedećim popisom:

Reagens (μL)	Epruveta (T)	Prazna cijev (B)
MDA radni reagens	600	600
Uzorak	200	–
Destilirana voda	–	200
Reagens ⅲ	200	200

Smjesa bi se inkubirala na 100 ℃ 60 minuta (čvrsto zatvorite kako biste spriječili gubitak vlage), ohlađen na ledu, i centrifugiran na 10000 × g za 10 minuta na sobnoj temperaturi za uklanjanje netopljivih materijala. Uzmite supernatant 1 ML staklena kiveta, i izmjerite apsorbanciju na 450 NM, 532 nm i 600 NM.

∆A450=A450(T)-A450(B), ∆A532=A532(T)-A532(B), ∆A600 =A600(T)-A600(B). Praznu epruvetu potrebno je testirati jednom ili dva puta.

Iii. Izračunavanje:

1. Tkivo, Bakterije ili kultivirane stanice

• Koncentracija proteina:

MDA (nmol/mg prot)= =(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×Vrv÷(Cpr × Vs)

=5×(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)÷Cpr

• Težina uzorka:

MDA (nmol/g težine)= =( 6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)×Vrv÷(W × vs ÷ vsv)

=5×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)÷W

• Cellamount:

MDA (nmol/104 stanica)= =( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 1.29×A∆450)×Vrv÷(400× vs ÷ vsv)

=0,01×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)

• Serum:

MDA (nmol/mL)= =(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)×Vrv÷Vs

=5×(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)

2. Tkivo biljaka:

• Težina uzorka

MDA (nmol/g težine)= = (6.45×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)×Vrv÷(W × vs ÷ vsv)

=5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)÷W

• Koncentracija proteina:

MDA (nmol/mg prot)= =( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)×Vrv÷(Cpr × Vs)

=5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)÷Cpr

Vrpca: Ukupni volumen reakcije, 1 ml; Vs: Volumen uzorka, 0.2 ml;

VSV: Valum ekstrakcije, 1 ml;

CPR: Koncentracija proteina uzorka, mg/ml; W: Težina uzorka, g;

400: Ukupni broj bakterija i stanica, 5 milijun.

Bilješka:

Ako se utvrdi da je vrijednost apsorbancije uzorka preniska, vrijeme kupelji s kipućom vodom može se podesiti 60 nekoliko minuta do 90 minuta ili duže. Detekciju MDA u istom eksperimentu potrebno je produžiti na isto vrijeme kako bi se izbjegle pogreške.

Reference

• Spitz D R, Oberley L W. Ispitivanje aktivnosti superoksid dismutaze u homogenatima tkiva sisavaca[J]. Analitička biokemija,1989
• Masayasu M, Hiroshi y. Pojednostavljena metoda ispitivanja superoksidne aktivnosti dismutaze za kliničku upotrebu[J]. Kemijska klinika

Povezani proizvodi:

BC3590/BC3595 vodikov peroksid (H2O2) Komplet za ispitivanje sadržaja

BC1090/BC1095 ksantin oksidaza (XOD) Kit za ispitivanje aktivnosti

BC0690/BC0695 Glukoza oksidaza (BOG) Komplet za analizu aktivnosti BC1270/BC1275 Komplet za analizu sadržaja karbonila proteina BC1280/BC1285 Diamin oksidaza (DAO) Komplet za analizu aktivnosti BC1290/BC1295 Komplet za analizu sadržaja superoksidnog aniona

Kupci’ Recenzije Solarbio proizvoda za referencu