Solarbio gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaza(Praznina) Kit za ispitivanje aktivnosti

Gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaza(Praznina) Kit za ispitivanje aktivnosti

Bilješka: Uzmite dva ili tri različita uzorka za predviđanje prije testa.

Instrument za otkrivanje: Spektrofotometar

Mačka ne: BC2210

Veličina: 25T/24 ; 50T/48s

Komponente:

Otopina ekstrakta: 60 ml × 1. Trgovina na 4 ℃.

Reagens i: Prah × 1. Čuvati na -20℃.

Reagens II: 50 ml × 1. Trgovina na 4 ℃.

Reagens iii: 30 μl × 1. Trgovina na 4 ℃. Tekućina se stavlja u EP cijev u boci reagensa. Prema doziranju i omjeru volumena reagensa III: destilirana voda od 3:100, Dobro promiješajte, koristite i pripremite se sada.

Opis proizvoda:

Praznina (EC 1.2.1.12) katalizira oksidaciju gliceraldehida 3-fosfata na 1,3-difosfoglicerid. To je ključni enzim puta glikolize. Usko je povezan s putem glukoneogeneze, Održavanje koncentracije glukoze u krvi i pojava dijabetesa. Igra važnu ulogu u poremećajima glukoze, metabolizam lipida i proteina.

3-Fosfoglicerat kinaza može katalizirati proizvodnju 1,3-difosfoglicerida iz trifosfata i ATP-a. GAPDH REVERVELY katalizira stvaranje gliceraldehida-3-fosfata, anorganski fosfor i NAD+ iz 1,3-difosfoglicerida i NADH. Smanjenje NADH izmjereno na 340 nm može odražavati aktivnost GAPDH.

Potreban materijal

Stolna centrifuga, ultraljubičasti spektrofotometar, Stalna temperaturna vodena kupka, minobacač/ homogenizator, 1 ML kvarcna kiveta, transferpettor, led i destilirana voda.

Postupak:

Ja. Uzorak Izvlačenje:

1. Uzorak tkiva:

Prema masi tkiva (g): volumen otopine ekstrakta (ml) je 1: 5~ 10. Predložen 0.1 g tkiva s 1 ML otopine ekstrakta. Potpuno mljeti na ledu, centrifuga na 8000 g i 4 ℃ za 20 min. Supernatant je stavljen na led za test.

2. Bakterije ili stanice:

Prema broju stanica (104): volumen otopine ekstrakta (ml) je 500 ~ 1000: 1. Preporučiti 5 milijun 1 ML otopine ekstrakta. Koristite ultrazvuku za podjelu bakterija ili stanica (vlast 20% ili 200W, Radno vrijeme 3s, Interval 10s, ponoviti za 30 vrijeme). Centrifuga na, 8000 g i 4 ℃ za 10 min. Supernatant je stavljen na led za test.

3. Serum (plazma): izravno mjerenje.

Ii. Odlučnost postupak:

• Zagrijte ultraljubičasti spektrofotometar 30 min, Podesite valnu duljinu na 340 nm, Postavite nulu s destiliranom vodom.
• Priprema radnog rješenja: Ulijte sav reagens II u jednu bocu reagensa i. Potpuno otopljen. Zagrijte određenu količinu od 37 ℃ (sisavac) ili 25 ℃ (Ostale vrste) za 10 min prema potrebi. Neiskorišteni reagensi čuvaju se na - 20 ℃ nakon podružnice. Izbjegavajte opetovano smrzavanje i odmrzavanje.
• Dodajte reagense sa sljedećim popisom:

Ime reagensa (μL)	Epruveta (T)	Prazna cijev (B)
Uzorak	30
Destilirana voda		30
Reagens iii	20	20
Radno rješenje	950	950
Dodajte gornje reagense u 1 ML kvarcna kiveta. Temeljito promiješajte. Izmjerite vrijednost apsorpcije A1 na 340 NM za 10s. Brzo ga stavite u vodenu kupelj ili inkubator na 37 ℃ (sisavac) ili 25 ℃ (Ostale vrste) za 5 min. Izvadite i brzo ga osušite. Izmjerite vrijednost apsorpcije A2 za 5min10s. Izračunajte ΔAT = A1T- A2t, ΔAb = a1b- A2B, ΔA = ΔAT – Δab. Prazna cijev treba testirati samo 1-2 puta.

Iii. Izračunavanje:

Izračunana mikro kvarcnim kivetom

• Izračunana koncentracijom proteina:

Definicija jedinice: Jedna jedinica aktivnosti enzima definirana je kao količina enzima konzumira 1 NMOL od NADH -a u reakcijskom sustavu u minuti, svaki Mg protein.

Aktivnost GAPDH (U/Mg Prot) = ΔA ÷(ε × D)× vrv × 109 ÷(VS × CPR)÷ t = 1072 × ΔA ÷ CPR

• Izračunana težinom uzorka

Definicija jedinice: Jedna jedinica aktivnosti enzima definirana je kao količina enzima konzumira 1 NMOL od NADH -a u reakcijskom sustavu u minuti, svaki uzorak.

Aktivnost GAPDH (U/g svježa težina) = ΔA ÷(ε × D)× vrv × 109 ÷(Vs × W ÷ vst)÷ t = 1072 × ΔA ÷ w

• Izračunana bakterijama ili količinom stanica:

Definicija jedinice: Jedna jedinica aktivnosti enzima definirana je kao količina enzima konzumira 1 NMOL od NADH -a u reakcijskom sustavu u minuti, svaki 104 Bakterije ili stanice.

Aktivnost GAPDH (U/104 ćelija) = ΔA ÷(ε × D)× vrv × 109 ÷(Vs × 500 ÷ vst)÷ t = 2,14 × ΔA

• Izračunato po volumenu kulture medija:

Definicija jedinice: Jedna jedinica aktivnosti enzima definirana je kao količina enzima konzumira 1 NMOL od NADH -a u reakcijskom sustavu u minuti, Svaka ml tekućina.

Aktivnost GAPDH (U/ml) = ΔA ÷(ε × D)× vrv × 109 ÷ vs ÷ t = 1072 × ΔA

 

e.: koeficijent molarnog izumiranja NADH: 6.22× 103 l/mol/cm; d: Lagani put kivete, 1 cm;

Vrpca: Ukupni volumen reakcije, 0.001 L;

Vs: Volumen uzorka u reakcijskom sustavu, 0.03 ml; Vst: dodana količina otopine za ekstrakciju, 1 ml; CPR: Koncentracija proteina uzorka, mg/ml;

W, Uzorak mase, g;

T: vrijeme reakcije, 5 min;

109: faktor pretvorbe, 1 mol = 109 nmol;

500: Broj stanica, 5 milijun.

Bilješka:

1. Kad je A1 manji od 0.8 ili je ΔA veći od 0.7, Preporučuje se razrijediti uzorak prije određivanja.
2. Prazna cijev je epruveta za ispitivanje kvalitete svake komponente reagensa. U normalnim uvjetima, Promjena ne prelazi01.

Eksperimentalni primjer:

1. Uzmite 0,1 g bubrega kunića, dodati 1 ML otopine ekstrakta, Homogenizirana u ledenoj kupelji, zatim centrifugira na 8000g, 4℃ za 20 min, Uzmi supernatant i stavite ga na led, Zatim djelujte s kivetom mikrokva u skladu s koracima određivanja, izmjeriti i izračunati: ΔAT = A1T-A2T = 0,815-0,158 = 0,657, ΔAb = a1b – A2B = 0,865-0,864 = 0,001, ΔA = ΔAT – ΔAb = 656.

Aktivnost GAPDH (U/g masa) = 1072 × ΔA ÷ w = 7032.32 U/g masa.

2. Uzmite 0,1 g djeteline, dodati 1 ML otopine ekstrakta, Homogenizirati ga u ledenoj kupelji, zatim ga centrifugirajte u 8000g i 4 ℃ za 20 min, Uzmi supernatant i stavite ga na led, Zatim djeluju prema koracima određivanja, Izmjerite i izračunajte s mikro kvarcnim kivetom, ΔAt = a1t – A2T = 1.026-1.017 = 0,009, ΔAb = a1b – A2B = 0,865-0,864 = 0,001, ΔA = ΔAT – ΔAb = 008.

Aktivnost GAPDH (U/g masa) = = 1072 × ΔA ÷ w = 85,76 U/g masa.

Povezani proizvodi：

BC0990/BC0995 Kit za ispitivanje biljnog klorofila

BC4330/BC4335 biljni karotenoidni komplet za ispitivanje