Ovaj proizvod treba biti prepun vrećica za led i otpremljen kroz FedEx ili UPS.
Stići će unutar 7-10 dana. Naknada za dostavu uključena je u cijenu proizvoda.
Predstavljanje proizvoda：
Ovaj komplet reagensa može pojačati i otkriti gen sačuvan CHD-W-W u uzorcima poput pera, krv, and tissues of pigeons, na taj način određuje njihov spol. Uvođenjem endogene unutarnje reference, Procesi ekstrakcije i pojačanja nukleinske kiseline mogu se nadgledati kako bi se osigurala točnost rezultata ispitivanja.
Sadržaj proizvoda：
| Komponente reagensa | AN2306001-01（24T） | AN2306001-02（48T） |
| GW reaction solution | 23µl/bunar × 8wells/Strip × 3Strips | 23µl/bunar × 8wells/Strip × 6stips |
| GW Positive control | 100μL | 100μL |
| Negativna kontrola | 100μL | 100μL |
Uvjeti skladištenja：
Čuvati na -20℃, rok trajanja je najmanje 12 mjeseca
Eksperimentalni rad：
1. Priprema uzorka (Područje pripreme uzorka)
1.1 Zahtjevi za uzorkovanje：
Perje: Prikupiti barem 5 perje iz prsa, trbuh, ili noge (uključujući dio osovine perja), i ne koristite prirodno proliveno perje.
Krv: Koristite EDTA kao antikoagulans, Ne koristite heparin kao antikoagulans. Treba koristiti svježu cijelu krv, ili se može pohraniti na 2 ~ 8 ℃ za do 7 dana, ili pohranjeno u -20 ℃ za do 3 mjeseca. Izbjegavajte ponovljeno smrzavanje i odmrzavanje što je više moguće.
Tkivo: Uzmite svježe mišićno ili organsko tkivo (Izbjegavajte korištenje uzoraka s kožom, tetive, ili fascia koju je teško obraditi) od ne više od 100 mg. Pripremite homogenat tkiva pomoću 200-500 μl sterilne vode, a zatim nastavite s naknadnim pripremama uzorka.
1.2 Priprema uzorka：
Please refer to the manual of the Three Lions Biotech “Komplet za brzu ekstrakciju životinjske genomske DNK (za PCR analiza)” (Broj dijela: DP202), ili drugi kompleti/metode za ekstrakciju nukleinskih kiselina koji udovoljavaju odgovarajućim zahtjevima, for the extraction of processed samples. Postavite ekstrahiranu nukleinsku kiselinu uzorka u okvir leda i pokušajte odmah nastaviti s testiranjem. Može se pohraniti na 4 ° C za do 7 Dani ili na -20 ° C za do 6 mjeseca.
2 . Priprema reakcijskog sustava (Područje reakcije za dodavanje uzoraka).
2.1 Take out n+2 reaction tubes containing GW positive control, GW negative control, i reakcijska otopina potrebna za eksperiment (n predstavlja broj uzoraka koji će se testirati, plus 1 pozitivna kontrola, i 1 negativna kontrola). Odmrznite reagense u potpunosti na sobnoj temperaturi, centrifuga za 10 sekundi, i okrenite tekućinu unutar zidova cijevi i poklopce na dno cijevi. Stavite ih u kutiju za kasniju upotrebu.
2.2 Zatim, Dodajte 2 μl negativne kontrole, ekstrahirani uzorak nukleinske kiseline, and GW positive control to the reaction solution in sequence. Zatvorite poklopce cijevi, Napravite odgovarajuće zapise, i osigurati da je ukupni volumen svake reakcije 25 μl. Temeljito pomiješajte sadržaj, centrifuga za 10 sekundi, a zatim nastavite s eksperimentom pojačanja na PCR instrumentu.
3. PCR pojačanje (Područje pojačanja i analize proizvoda).
The PCR amplification process is as follows: Pre-denaturation at 95℃ for 3 minuta; Denaturation at 95℃ for 10 sekundi, Annealing and extension at 58℃ for 30 sekundi, za ukupno 35 ciklusi. Collect fluorescence signals at 58℃. In the fluorescence detection, select FAM for the first channel (for the CHD-W gene), and select VIC/HEX for the second channel (for the endogenous reference gene). If using an ABI series real-time fluorescence quantitative PCR instrument, you may contact the manufacturer in advance or add ROX calibration dye by yourself if needed; inače, Slijedite normalan postupak.
4. Određivanje rezultata
4.1 Ako su CT vrijednosti pozitivne kontrole i u FAM kanalu i na Vic/Hex kanalu <28 i pokazati an “S”-oblikovana krivulja pojačanja, a negativna kontrola nema CT vrijednost ili CT vrijednost ≥35, a NO “S”-oblikovana krivulja pojačanja, eksperimentalni rezultat vrijedi. Inače, Eksperiment bi trebao biti ponovljen, i ako je ponovljeni eksperiment još uvijek nevažeći, Molimo kontaktirajte tehničko osoblje proizvođača.
4.2 Vrijednost ct uzorka u vic/hex kanalu treba biti ≤30 i pokazati “S”-oblikovana krivulja pojačanja, što ukazuje da su ekstrakcija i pojačavanje uzorka učinkovite. Ako nema CT vrijednosti ili je vrijednost CT 30 < CT ≤ 35 u kanalu Vic/Hex, to ukazuje da ekstrakcija nukleinske kiseline uzorka nije standardna ili postoji snažna smetnja inhibicije (poput ostataka alkohola ili dezinfekcijskih sredstava, antikoagulansi, itd.) koji inhibira pojačavanje. Preporučuje se preraditi uzorak za ekstrakciju i pojačavanje nukleinske kiseline.
4.3 Nakon otkrivanja u VIC/HEX kanalu vrijedi, Određivanje u FAM kanalu izvodi se na sljedeći način:
- Ct vrijednost ≤ 30 i an “S”-promatra se oblikovana krivulja pojačanja, određuje se kao pozitivan za chd-w gen, što ukazuje da je uzorak od ženke.
- Ct value is 30 < Ct < 32, Svi se smatraju sumnjivim, te se preporučuje ponovno testiranje (predlaže se da se prvo isključi “lažno pozitivan” Rezultati uzrokovani kontaminacijom aerosola u okolišu, a zatim nastavite ekstrakcijom nukleinske kiseline i testiranjem). Ako ponovno testiranje na FAM kanalu nakon isključenja kontaminacije aerosola pokazuje CT vrijednost < 30 i jasna krivulja pojačanja, određuje se kao pozitivan za chd-w gen; inače, određuje se kao negativan.
- Nema Ct vrijednosti ili Ct vrijednost ≥ 32 i br “S”-oblikovana krivulja pojačanja, određuje se kao negativan za chd-w gen, što ukazuje na to da uzorak može doći od mužjaka.
Mjere predostrožnosti：
1） Kako bi se spriječilo zagađenje, Eksperiment se treba provesti strogo s podjelu s podjelom. Poželjno je imati fizičku izolaciju između particija kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija uzrokovana ljudskim čimbenicima. Tijekom eksperimenta nosite laboratorijske kute i rukavice od lateksa, i koristite odvojene alate u različitim područjima. Po potrebi promijenite rukavice i laboratorijske kapute. Nakon PCR -a, Ne otvarajte poklopce odmah. Pričekajte dovoljno hlađenja prije otvaranja za uzorkovanje kako biste umanjili onečišćenje aerosola.
2） Odmagnite reagense prije upotrebe, ali izbjegavajte opetovano smrzavanje i odmrzavanje. Slijedite upute strogo za pripremu reagensa, Dodatak uzorka, i drugi koraci. Radna ploča, centrifuga, pipete, i druge instrumente treba redovito dezinficirati pomoću dezinfekcijskih sredstava koja sadrže klor, etanol, Sredstva za uklanjanje onečišćenja nukleinske kiseline, ili ultraljubičaste svjetiljke.
3） Negativni rezultat ne znači nužno i muškarac. Nepoznate mutacije, Loša kvaliteta uzorka, niska koncentracija, ili prisutnost snažnih inhibicijskih tvari u ekstrakciji nukleinske kiseline (testiranje) također može dovesti do “negativan” rezultati. Ovaj se komplet koristi samo za specifično pojačavanje gena CHD-W u papiga. Za ostale proizvode, Molimo konzultirajte proizvođača.
4） Ovaj je proizvod samo za jednokratnu upotrebu. Ne više puta se smrzavaju i ne otapaju. To je samo za znanstvene istraživačke svrhe i ne smije se koristiti za kliničku dijagnozu ili druge svrhe.
