Komplet za otkrivanje nukleinske kiseline za identifikaciju spola ptica (PCR metoda)

• Stavka br： An2206001
• Specifikacija：48T 100T

Predstavljanje proizvoda：

Ovaj komplet može pojačati specifične fragmente nukleinske kiseline iz uzoraka poput perja, krv, i tkivo raznih ptica (uključujući Psittaciformes, Columbiformes, Galiformes, Cikonindes, Grupira, i neki anseriformes), korištenje PCR.

Uključuje anti-inhibiciju 2 × Taq PCR Master Mix (s bojom) i druge komponente potrebne za PCR. Pojačani proizvodi mogu se izravno podvrgnuti elektroforezi agaroznog gela za određivanje rezultata.

Sadržaj proizvoda：

Komponente reagensa	AN2206001-02 （100T）
Reagens c	1ml
Reagens D	1ml
Reagens e	100µl

Uvjeti skladištenja：

Čuvati na -20℃, rok trajanja je najmanje 12 mjeseca

Obrada uzorka:

Pogledajte životinjski genomski DNA komplet za brzo ekstrakciju (Za PCR analizu) Priručnik za upute iz Sanshibio (Broj proizvoda: DP202) za obradu uzoraka. Pohranite obrađene uzorke za kasniju upotrebu.

1. Eksperimentalni rad：

• Priprema uzorka (Prostor za pripremu uzorka)
• Ekstrakcija nukleinske kiseline:
• Slijedite upute iz “Komplet za brzu ekstrakciju životinjske genomske DNK (Za PCR analizu)” ili upotrijebite bilo koji drugi prikladni komplet/metoda za ekstrakciju nukleinske kiseline koji ispunjava zahtjeve. Ekstrakciju nukleinskih kiselina iz obrađenih uzoraka.
• Najbolje je što prije testirati ekstrahirane nukleinske kiseline. Držite ih na ledu, ili ih pohraniti na 4 ° C ili -20 ° C ako se ne koriste odmah.

2. Priprema reakcijskog sustava (Područje dodavanja uzorka)

2.1 Priprema reakcijske smjese:

• Izračunajte volumen potrebnih reagensa na temelju broja uzoraka.
• Specifična priprema je sljedeća: Pipeta (n × 7.5 µl ispitnog reagensa C + n × 10 µl ispitnog reagensa D + n × 1 µl testnog reagensa e) u čistu cijev za centrifugu. Temeljito pomiješajte pipetting, i alikvot 18 µl u svaku jažicu a 0.2 ML PCR cijev (centrifuga). (Ako ima mnogo uzoraka, Pripremite smjesu unaprijed i nakratko je pohranite na 2-8 ° C; iskoristiti 2 sati.)

2.2 Dodati 2 µl izvađeni uzorak nukleinske kiseline u svaku reakcijsku smjesu, prekrivati ​​cijevi, Zabilježite detalje, i donijeti ukupni volumen 20 µl po reakciji. Dobro pomiješajte i centrifugu za 30 sekunde prije stavljanja u a PCR stroj Za pojačavanje.

PCR amplifikacija (Područje pojačanja i analize proizvoda)

PCR protokol:

• Početna denaturacija na 94 ° C za 3 minuta.
• 32 ciklusi: 94° C za 30 sekundi (denaturacija), 50° C za 45 sekundi (žalost), 72° C za 50 sekundi (produženje).
• Konačno produženje na 72 ° C za 8 minuta, Zatim držite na 4 ° C.
• Proizvodi za pojačavanje temeljito ohladite na 4 ° C (ili brzo na -20 ° C za otprilike 5 minuta) za 15 minuta.

Elektroforeza agaroze(Korištenje horizontalne elektroforeze gela kao primjer kao primjer)

4.1 Priprema gela:

Prema količini gela za lijevanje i koncentracije gela (1%~ 1,5%), Izmjerite odgovarajući volumen pufera za elektroforezu (Tae ili tbe, s brojevima proizvoda DA001 ili DA002, ili ekvivalentni proizvodi koji ispunjavaju zahtjeve), i ulijte ga u trokutastu tikvicu.

Bilješka: Pufer za lijevanje gela i pufer elektroforeze mora biti dosljedan.

4.2 Pažljivo izvažite agarozu (Broj proizvoda: Da003, ili ekvivalentni brend), i dodajte ga u tikvicu. Pokrijte tikvicu pergamentnim papirom ili brtvenim filmom i otopite agarozu zagrijavanjem u mikrovalnoj pećnici. Zagrijte do vrenja, Nosite rukavice otporne na toplinu, I nježno navijajte tikvicu. Ponavljajte dok se agaroza u potpunosti ne otopi.

Bilješka: Proces otapanja agaroze trebao bi koristiti višestruke kratke ključanja kako bi se spriječilo pregrijavanje otopine i vrištanje. Osigurajte da se agaroza u potpunosti otopi kako ne bi izazvala nejasne slike elektroforeze.

4.3 Dodajte boju nukleinske kiseline (Broj proizvoda: Da004, ili ekvivalentni brend) do potpuno otopljene agaroze.

4.4 Ulijte otopinu agaroze u ladicu za lijevanje gela i umetnite češalj u odgovarajuće položaje. Debljina gela trebala bi biti između 3 do 5 mm.

4.5 Dopustite da se gel očvrsne na sobnoj temperaturi (oko 30 nekoliko minuta do 1 sat). Pažljivo uklonite češalj i stavite gel u spremnik za elektroforezu koji je ispunjen puferom elektroforeze.

Elektroforeza i opterećenje uzorka:

4.6 Opterećenje 5 µl markera DNK (Broj proizvoda: Da005, ili ekvivalentni brend) i 10 µl od ohlađenih proizvoda za pojačavanje u bušotine. Nakon učitavanja svih uzoraka, Neka stoji za 2 Nekoliko minuta prije uključivanja napajanja. Postavite napon (70-120V) i vrijeme trčanja (20-30 minuta) Prema uvjetima.

Tumačenje rezultata

Određivanje rezultata:

• Ako se jedan pojas pojavi približno na 700 bps, Uzorak je utvrđen da je muški.
• Ako se dva pojačana pojasa pojave oko 700bp i 400bp (ili se pojavljuje samo jedan pojačani pojas oko 400bp), Uzorak je utvrđen da je žensko.
• Ako nisu vidljivi bendovi, Specifični geni za identifikaciju ptičjeg spola nisu otkriveni u uzorku. Preporučuje se ponovno preuređenje ekstrakcije i pojačanja nukleinske kiseline ili kontaktirati tehničku podršku proizvođača za pomoć.

Mjere predostrožnosti：

• Za sprječavanje kontaminacije, eksperiment treba biti strogo podijeljen, s fizičkom izolacijom između različitih zona kako bi se izbjeglo unakrsna kontaminacija uzrokovana ljudskim čimbenicima. Tijekom eksperimenta nosite laboratorijske kute i rukavice od lateksa, i koristite odvojene alate u različitim područjima. Rukavice i laboratorijski kaputi trebaju se mijenjati prilikom kretanja između područja.
• Reagense treba u potpunosti odmrznuti prije upotrebe, ali treba izbjegavati ponovljene cikluse zamrzavanja i odmrzavanja. Slijedite upute strogo za pripremu reagensa i dodavanje uzoraka. Radne pločice, centrifuge, pipete, i druge instrumente treba redovito dezinficirati pomoću dezinfekcijskih sredstava koja sadrže klor, etanol, sredstva za dekontaminaciju nukleinske kiseline, ili UV svjetiljke.
• Nakon završetka PCR reakcije, nemojte odmah otvarati poklopac. Pričekajte da se dovoljno ohladi prije otvaranja kako biste izbjegli onečišćenje aerosola u maksimalnoj mogućoj mjeri.
• Ovaj se komplet koristi samo za pojačavanje specifičnih gena kod nekih ne-paserinskih ptica (perad), za ostale srodne proizvode, Molimo posavjetujte se sa Sanli Bio. Ovaj je proizvod namijenjen samo znanstvenim istraživanjima i nije namijenjen kliničkoj dijagnozi ili drugim svrhama.