Herpesvirus de la paloma (PiHV) Kit de prueba de ácido nucleico (UNG, Método de sonda fluorescente de PCR)

Artículo No: AP2409002 Especificación: 50t/100t Almacenamiento: -20℃

Introducción del producto:

Herpesvirus de la paloma (PiHV) ¿Es una enfermedad infecciosa viral que afecta principalmente a las palomas jóvenes causadas por el tipo de herpesvirus de paloma 1 (PiHV1). Es un patógeno importante que conduce al síndrome de la enfermedad de Pigeon Squab en palomas jóvenes. Clínicamente, Se caracteriza por síntomas como la inflamación nasal y conjuntival. Las palomas infectadas también pueden exhibir depresión, disminucion del apetito, diarrea, vómitos, y síntomas neurológicos. Por lo tanto, temprano, rápido, y la detección conveniente del PiHV es crucial para el diagnóstico, ralentizar la propagación de la enfermedad, y prevenir complicaciones. Este kit de prueba está diseñado en base a las secuencias conservadas en el gen PIHV, con condiciones optimizadas, habilitando cuantitativa fluorescente precisa PCR Prueba de oral, hisopos cloacales, sangre, y otras muestras de tejido de aves. Esto permite una determinación rápida de si el huésped está infectado con PIHV.

Contenido del producto:

Componentes reactivos	AN2409002-02 (50t)	AN2409002-03 (100t)
Reactivo de prueba de PIHV	1150µL	1150µl × 2
PIHV Control positivo	100µL	100µL
Control negativo	100µL	100µL

Condiciones de almacenaje:

Almacenar a -20 ℃, la vida útil es al menos 12 meses.

Operación experimental:

1. Preparación de la muestra (Área de preparación de muestras)

1.1 Requisitos de muestra:

-Hisopo oral/clocal: Use un hisopo de algodón estéril para insertar en la garganta o cloaca del pájaro, girando tres veces. Retírelo y colóquelo en un tubo de centrífuga, cortando la parte expuesta, Luego, limite de forma segura el tubo y etiquételo. Muestras que se pueden probar dentro 24 Las horas se pueden almacenar a 2-8 ° C; Las muestras que no se pueden probar rápidamente deben almacenarse a -20 ° C.

-Sangre entera: Utilice EDTA como anticoagulante.; No uses heparina. Se requiere sangre entera fresca, o se puede almacenar a 2-8 ° C para no más de 7 días, o a -20 ° C por no más de 3 meses. Los ciclos repetidos de congelación-descongelación deben evitarse tanto como sea posible.

-Tejido: Tomar el tejido hepático fresco que no exceda 100 mg, y prepare un homogeneizado de tejido usando 200-500 μl de agua estéril para la preparación de la muestra posterior.

1.2 Preparación de la muestra:

Consulte Sanshibio “Kit de extracción rápida del genoma animal de ADN (para análisis de PCR) Manual” (Catálogo No.: DP202), u otros kits/métodos de extracción de ácidos nucleicos que cumplan los requisitos pertinentes, extraer ácidos nucleicos de muestras procesadas. Las muestras de ácido nucleico extraído deben colocarse en una caja de hielo y probarse lo antes posible; se pueden almacenar a 4 ° C por no más de 7 días o a -20°C durante no más de 6 meses.

2. Preparar el sistema de reacción (Área de adición de muestra)

2.1 Saca cada componente del kit., descongelar completamente a temperatura ambiente, y centrífuga para 10 segundos para recolectar líquido de las paredes y tapas del tubo en la parte inferior. Prepare el sistema de reacción de acuerdo con el número de muestras (n+2) (es decir., n muestras de prueba + 1 control positivo + 1 control negativo). Específicamente, preparar (n+2) Tubos de PCR, dispensando 23 μl del reactivo de prueba de PIHV en cada tubo, y manténgalos en una caja de hielo para su uso posterior.

2.2 Entonces, Agregar secuencialmente 2 μl del control negativo, ácido nucleico de muestra extraída, y control positivo de PIHV al reactivo de prueba. Limitar los tubos de forma segura y registrar la información; El volumen total para cada reacción debe ser de 25 μl. Mezclar bien, centrífuga para 10 segundos, y realizar el experimento de amplificación en el instrumento de PCR.

3. Amplificación por PCR (Área de Amplificación y Análisis de Productos)

50° C Ung Descontaminación enzimática para 2 minutos; 95° C preenaturación para 2 minutos; 95° C desnaturalización para 10 segundos, seguido de 60 ° C recocido y extensión para 35 segundos, para 40 ciclos, recolectando señales de fluorescencia a 60 ° C. Seleccione el canal de fluorescencia Fam (Si usa la serie ABI o instrumentos de PCR cuantitativos en tiempo real similares, Póngase en contacto con el fabricante con anticipación si es necesario o agregue el tinte de calibración ROX usted mismo; de lo contrario, seguir el procedimiento normal).

4. Determinación de resultados

4.1 Condiciones para validar los resultados experimentales:

Valor Ct del canal FAM de control positivo < 28 y exhibe un “S” curva de amplificación en forma; el control negativo no tiene valor Ct o valor Ct ≥ 38 y no “S” curva de amplificación en forma, Indicando resultados válidos; de lo contrario, repetir el experimento. Si la repetición permanece inválida, póngase en contacto con el personal técnico del fabricante..

4.2 Determinación del resultado de la muestra:

Valor CT ≤ 33 y exhibe un “S” curva de amplificación en forma, juzgado como pihv positivo;

valor ct 33 < Connecticut < 38 se considera sospechoso; Se recomienda volver a probar (La extracción de ácido nucleico puede ser deficiente o hay fuertes contaminantes inhibitorios (p.ej., residuos de desinfectantes, anticoagulantes) inhibición de la amplificación; Sugerir reprocesar la muestra para la extracción y amplificación del ácido nucleico; Primero descarta los resultados falsos positivos causados ​​por la contaminación de aerosol antes de reexpresar los ácidos nucleicos y volver a probar). Si se descarta la contaminación del aerosol y el canal FAM vuelve a probar el valor de CT < 33 con una curva de amplificación clara, se determina como pihv positivo; de lo contrario, se determina como negativo;

Sin valor Ct o valor Ct ≥ 38 y no “S” La curva de amplificación con forma se determina como PIHV negativo.

Precauciones:

• Para prevenir la contaminación, el experimento debe estar estrictamente dividido, y se prefiere el aislamiento físico entre particiones para evitar la contaminación cruzada debido a factores humanos. Use batas de laboratorio y guantes de látex durante el experimento., utilizar herramientas de forma independiente en diferentes áreas, cambiarse guantes y batas de laboratorio cuando sea necesario. Después de la PCR, no abra la tapa inmediatamente; Ábralo después de enfriarlo lo suficiente para minimizar la contaminación por aerosoles..
• Descongelar completamente los reactivos antes de su uso., pero evite ciclos repetidos de congelación y descongelación.. Los tubos de reacción de PCR incluidos en el kit son de 0,2 ml.; si es necesario un reemplazo, transferir después de la descongelación completa. Siga estrictamente las instrucciones para la preparación de reactivos y la adición de muestras.. Estaciones de trabajo, centrífugas, pipetas, y otros instrumentos deben desinfectarse periódicamente con desinfectantes que contengan cloro, alcohol, agentes de descontaminación de ácidos nucleicos, o luz ultravioleta.
• Un resultado negativo no significa necesariamente que el huésped no esté infectado con el virus.. Mala calidad de la muestra, baja carga de virus, o la presencia de sustancias inhibidoras fuertes (como el alcohol, desinfectantes, anticoagulantes, etc.) puede resultar en una extracción fallida de ácido nucleico (detección) y un “negativo” resultado. Seguir los criterios de interpretación de resultados., y cuando hay resultados sospechosos, primero excluir la contaminación por aerosoles. Si hay otras preguntas, contactar con el personal técnico del fabricante.
• Este producto es para un solo uso.. Los componentes del reactivo son sensibles a la luz natural.; Evite la exposición a la luz durante el embalaje y almacenamiento.. Después del embalaje, no congelar y descongelar repetidamente. Sólo para uso en investigación científica.; no para diagnóstico clínico u otros fines.