Paraffin-embedded Tissue DNA Extraction Kit

1. Componentes del kit de reactivos

Especificaciones	50t	100t
Gato. No.	SN0251	SN0252
Columnas de extracción de ADN (colocar)	50 (colocar)	100 (colocar)
Tampón reactivo IV	20 ml	2 × 20 ml
Tampón reactivo C	30 ml	2 × 30ml
Reagent Buffer FF	60 ml	2 × 60ml
Tampón de lavado 1	15 ml	2 × 15 ml
Tampón de elución	20 ml	20 ml
Proteinasa K	1ml	2x1ml
ARNasaA	1ml	2x1ml
Manual de instrucciones	1	1

2. Almacenamiento

Este kit de reactivos debe almacenarse a temperatura ambiente. (15-25℃) y en condiciones secas, con una vida útil de 12 meses. Las columnas de purificación y extracción de ADN se pueden almacenar durante 1 año en un ambiente fresco y seco. Proteinasa K y ARNasa A contienen conservantes, permitiendo el transporte a temperatura ambiente, pero para almacenamiento a largo plazo, deben mantenerse a -20 ℃.

3. Instrucciones para usar el kit de reactivos

3.1 Este kit de reactivos está destinado a la investigación de biología molecular y no debe utilizarse para el diagnóstico o tratamiento de enfermedades..

3.2 Algunos componentes del kit de reactivos contienen irritantes.. Se recomiendan medidas de protección como el uso de ropa y gafas protectoras..

3.3 Durante el uso de este kit de reactivos, una centrífuga de alta velocidad, baño de agua (baño de metal), mezclador Vortex, etanol anhidro, agua desionizada estéril, y los tubos EP deben ser preparados por el usuario.

4. Introducción al kit de reactivos

 

Paraffin-embedded tissue purificación de ADN kit provides a rapid and effective DNA purification solution for samples in paraffin sections. Tissues are collected after paraffin dissolution using a dedicated dewaxing solution, and sample DNA is obtained through subsequent extraction processes.

 

This kit can extract sample DNA from paraffin sections within 30 minutos, y todo el proceso de purificación no requiere reactivos tóxicos como fenol-cloroformo. El ADN extraído se puede utilizar directamente para PCR, transferencia del sur, y otras aplicaciones.

5. Principios y procedimientos experimentales

6. Proceso de extracción

Antes de comenzar el experimento:

A. Reagent Buffer FF:This buffer should be stored long-term in an environment between 2°C and 8°C.

B. Reagent Buffers IV and C puede precipitar en condiciones de baja temperatura. Se recomienda calentar a 65°C durante 5 minutos. Después del precipitado se disuelve, the solution can be used normally.

C. LavarBuffer 1 should have a specified amount of anhydrous ethanol added before use, como se indica en la etiqueta del frasco de reactivo. Check the label with a tick mark to indicate the addition of anhydrous ethanol.

D. El tampón de elución es un 0.1x solución TE with a minimal amount of EDTA. Si el EDTA afecta a experimentos posteriores, it is advisable to replace the elution buffer with sterile deionized water.

 

1. Procesamiento de muestras:

Select 5-10 paraffin sections (1mm-3mm thickness), use scissors to remove excess wax, and cut the embedded tissue sample into small pieces. Place them in a 1.5ml centrifuge tube, agregar 800μl Reagent Buffer FF, incubate at 75°C for 5 minutes until all paraffin is dissolved. Centrifuge at 12000rpm for 5 minutos, descartar el sobrenadante.

2. Agregar 400μl Reagent Buffer IV, 20μl proteinasa k (10 mg/ml), and 10μl RNaseA (10 mg/ml) to the precipitate from the previous step. Digest at 65°C, stirring every 6-7 veces hasta que se complete la digestión.
3. Agregue un volumen igual de Tampón reactivo Cy an equal volume of anhydrous ethanol, mix thoroughly by pipetting.

(Por ejemplo: If you add 400μl Reagent Buffer IV, approximately add 430μl Reagent Buffer C and 430μl anhydrous ethanol. Some precipitation may occur after adding Reagent Buffer C, pero no afecta los experimentos posteriores.)

4. Add the obtained liquid to the DNA extraction purification column (or cartridge) (Aproximadamente 650-700 μl cada vez), let it stand at room temperature for 2 minutos, centrifuge at over 8,000rpm for 1 minuto. Discard the collected waste and reinsert the collection tube into the purification column for the next step.
5. Repita el paso 4, Agregar el líquido restante a la columna de purificación de extracción de ADN (or cartridge), centrifuge at over 8,000rpm for 1 minuto, discard the waste and the collection tube.
6. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (or cartridge) en el tubo de recolección, agregar 300µl LavarBuffer 1, centrifuge at over 8,000rpm for 1 minuto. Discard the waste and reinsert the purification column into the tube for the next step.

(Nota: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Lavar Buffer 1.)

7. Agregar 500µl LavarBuffer 1 a la columna de purificación de extracción de ADN (or cartridge), centrifuge at 14,000rpm (20000×g) para 2 minutos. Extend centrifugation time if needed for a dryer membrane.
8. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (or cartridge) in a new centrifuge tube, abrir la tapa, incubar a 65 ° C para 2 minutos. Extend this step if necessary to evaporate ethanol to prevent residual ethanol from affecting downstream experiments.
9. Suspend the addition of 50-100µl de tampón de elución to the membrane, centrifuge at 12,000rpm for 2 minutos.

(Nota: 1. Using 50μl Elution Buffer for DNA elution can increase DNA concentration but decreases total DNA yield. 2. El ADN eluido se puede volver a aplicar a la columna de purificación de extracción de ADN, centrifuged at 12000rpm for 2 minutes again to increase DNA yield.)