Kit de extracción de ADN genómico de hisopo oral

1. Componentes del kit de reactivos

Especificaciones	50t	100t
Gato. No.	SN0233	SN0234
Columnas de extracción de ADN (colocar)	50 (colocar)	100 (colocar)
Tampón reactivo B	20 ml	2×20 ml
Tampón reactivo C	30 ml	2×30 ml
Tampón de lavado 1	15 ml	2 × 15 ml
Tampón de elución	20 ml	20 ml
Proteinasa K	1ml	1ml
ARNasa A	1ml	1ml
Manual de instrucciones	1	1

 

2. Almacenamiento

Este kit de reactivos debe almacenarse a temperatura ambiente. (15-25℃) y en condiciones secas, con una vida útil de 12 meses. Las columnas de purificación y extracción de ADN se pueden almacenar durante 1 año en un ambiente fresco y seco. Proteinasa K y ARNasa A contienen conservantes, permitiendo el transporte a temperatura ambiente, pero para almacenamiento a largo plazo, deben mantenerse a -20 ℃.

3. Instrucciones para usar el kit de reactivos

3.1 Este kit de reactivos está destinado a la investigación de biología molecular y no debe utilizarse para el diagnóstico o tratamiento de enfermedades..

3.2 Algunos componentes del kit de reactivos contienen irritantes.. Se recomiendan medidas de protección como el uso de ropa y gafas protectoras..

3.3 Durante el uso de este kit de reactivos, una centrífuga de alta velocidad, baño de agua (baño de metal), mezclador Vortex, etanol anhidro, agua desionizada estéril, y los tubos EP deben ser preparados por el usuario.

4. Introducción al kit de reactivos

 

El hisopo oral Purificación de ADN El kit proporciona un método rápido y eficiente para purificar el ADN de los hisopos orales, ampliamente utilizado para la extracción de células epiteliales como el epitelio oral.

 

El kit de purificación rápida de ADN de hisopo oral puede extraer ADN total de células epiteliales orales dentro de 30 minutos. Todo el proceso de purificación no requiere reactivos tóxicos como el fenol-cloroformo.. El ADN extraído se puede utilizar directamente para PCR, transferencia del sur, y otras aplicaciones.

5. Principios y procedimientos experimentales

6. Proceso de extracción

Antes de comenzar el experimento:

A. Buffer de reactivo B y C puede precipitar en condiciones de baja temperatura. Recomendamos calentar a las 65 ℃ para 5 minutos. Después del precipitado se disuelve, se puede utilizar normalmente.

B. Antes de usar, agregue la cantidad especificada de etanol anhidro a Tampón de lavado 1Como se indica en la etiqueta de la botella. Marque una verificación de la etiqueta para indicar la adición de etanol anhidro.

C. El tampón de elución es un0.1x solución TEque contiene cantidades mínimas de EDTA. Si el EDTA podría afectar experimentos posteriores, Es aconsejable sustituir el tampón de elución con agua desionizada estéril.

1. Manejo de muestras:
2. Muestreo: Tome un hisopo de algodón esterilizado, inserte en la boca, frotar contra la mejilla interna de un lado a otro por más de 20 veces.
3. Use tijeras para cortar la cabeza del hisopo de algodón, colóquelo en un 2 Ml tubo de centrífuga, y agregar 400µl de Reactivo Búfer B.
4. Agregar10μl proteinasa k (10 mg/ml) y 10 μl de RNase A (10 mg/ml), invertir a fondo, incubar a 65 ° C para 20 minutos, vórtice para 10 segundos durante la incubación.
5. Agregar 400µl de Reactivo Buffer Cal lisado, vórtice a fondo.
6. Agregar 200μl de etanol absoluto precedido, mezclar bien; La precipitación puede ocurrir, pero no afectará los experimentos posteriores..
7. Transferir el líquido obtenido a una columna de extracción y purificación de ADN (equipo) (aproximadamente 650~700μl cada vez), centrifugar en >8,000 rpm para 1 minuto, Deseche el líquido de desechos recolectados, y reinsertar el tubo de recolección en la columna de extracción y purificación de ADN (equipo) para el siguiente paso.
8. Coloque la columna de extracción y purificación de ADN (equipo) en un tubo de recolección, agregar 300μl de tampón de lavado 1, centrifugar en >8,000 rpm para 1 minuto, Deseche el líquido de desechos, y reinsertar la columna de extracción y purificación de ADN (equipo) en el tubo para el siguiente paso.

(Nota: Asegúrese de que se haya agregado etanol absoluto al tampón de lavado 1.)

7. Agregar 500μl de tampón de lavado 1a la columna de extracción y purificación de ADN (equipo), centrifugar en 14,000 rpm (20,000×g) para 2 minutos, extender el tiempo de centrifugación adecuadamente para secar la membrana aún más.
8. Coloque la columna de extracción y purificación de ADN (equipo) en un nuevo tubo de centrífuga, abrir la tapa, incubar a 65 ° C para 2 minutos; Este paso se puede extender adecuadamente para evaporar el etanol tanto como sea posible., Pediendo que el etanol residual afecte los experimentos aguas abajo.
9. Eluir 100μl de tampón de eluciónsobre la membrana, centrifugar en 12,000 rpm para 2 minutos.

(Nota: 1. Eluir el ADN con 50 μl de tampón de elución puede aumentar la concentración de ADN pero disminuir el rendimiento total del ADN; 2. El ADN eluido en el eluato se puede volver a aplicar a la columna de extracción y purificación de ADN, centrífuga nuevamente en 12,000 rpm para 2 minutos para aumentar el rendimiento del ADN.)