TDT, o ditiotreitol, es un agente reductor comúnmente utilizado en laboratorios de bioquímica y biología molecular. Es una molécula pequeña que contiene dos tioles (sulfhidrilo) grupos y se utiliza para romper los enlaces disulfuro en proteínas y mantener un entorno reductor en varios ensayos bioquímicos. El número CAS para DTT es 3483-12-3.
Usos de DTT:
- Desnaturalización y despliegue de proteínas:
- DTT a menudo se usa para reducir los enlaces disulfuro en proteínas, conduciendo a la desnaturalización y el desarrollo de la estructura de la proteína. Esto es particularmente útil al estudiar el plegado de proteínas o al preparar proteínas para el análisis..
- Activación enzimática:
- Algunas enzimas requieren un entorno reductor para estar activo. DTT se usa para mantener una condición reductora, Asegurar el funcionamiento adecuado de estas enzimas.
- Reducción de agregados de proteínas:
- DTT se puede usar para reducir los agregados de proteínas o proteínas mal plegadas, Facilitar su solubilización y separación durante experimentos como la electroforesis en gel.
- Prevención de la oxidación en el cultivo celular:
- En cultivo celular, DTT a veces se agrega al medio para evitar la oxidación de los residuos de cisteína en las proteínas y mantener las condiciones reductoras necesarias para ciertos procesos celulares.
Cómo usar DTT:
- Preparación de la solución DTT:
- Disolver DTT en un tampón o solvente apropiado para crear una solución DTT de la concentración deseada. Las concentraciones de uso común van desde 1 mm a 100 milímetro, Dependiendo de la aplicación específica.
- Adición a muestras de proteínas:
- DTT generalmente se agrega directamente a muestras de proteínas o mezclas de reacción para lograr las condiciones reductoras deseadas. La concentración de DTT debe optimizarse en función de los requisitos experimentales específicos.
- Incubación:
- Permita que la mezcla de reacción se incube durante un período suficiente para permitir que DTT reduzca los enlaces disulfuro. El tiempo de incubación puede variar según la configuración experimental y los objetivos específicos del estudio.
- Temple:
- Después de que se complete la reacción de reducción, Es esencial calmar el exceso de DTT para evitar la interferencia con las aplicaciones aguas abajo. Esto se puede lograr agregando un reactivo de enfriamiento o por otros métodos apropiados.
- Análisis:
- Continúe con el análisis de sus muestras, si involucra electroforesis en gel, ensayos enzimáticos, u otras técnicas bioquímicas.
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