ARN total bacteriano (más) Kit de extracción

1. Componentes del kit de reactivos

Especificaciones	50t	100t
Gato. No.	SN0321-D	SN0322-D
Columnas de extracción de ARN (colocar)	50(colocar)	100(colocar)
Columnas de limpieza de ADN (colocar)	50(colocar)	100(colocar)
Extracción de ARN Tampón I	30ml	2× 30 ml
Tampón de eliminación de inhibidores	30ml	2×30ml
Tampón de lavado 1	15 ml	2×15ml
Tampón de elución	20ml	2×20ml
lisozima	5ml	2x5ml
Manual de instrucciones	1	1

2. Almacenamiento

Este kit de reactivos debe almacenarse a temperatura ambiente. (15-25℃) en un ambiente seco y puede conservarse durante 12 meses. La lisozima contiene un conservante., permitiendo el transporte a temperatura ambiente; sin embargo, para almacenamiento a largo plazo, debe almacenarse a -20 ℃

3. Instrucciones para usar el kit de reactivos

3.1 Este kit está destinado a fines de investigación de biología molecular y no debe utilizarse para el diagnóstico o tratamiento de enfermedades..

3.2 Algunos componentes del kit contienen irritantes.; es recomendable tomar las precauciones necesarias (como usar ropa y gafas protectoras).

3.3 El uso de este kit requiere equipo adicional como una centrífuga de alta velocidad., baño de agua (baño de metal), mezclador Vortex, etanol anhidro, nitrógeno líquido, cloroformo, agua desionizada estéril, y tubos EP.

4. Introducción al kit de reactivos

Este kit de purificación de ARN proporciona una solución de purificación rápida y eficiente para ARN bacteriano., adecuado para la mayoría de los tejidos bacterianos. El kit emplea tecnología de eliminación de ADN para eliminar eficazmente el ADN genómico., y las muestras de ARN resultantes normalmente no requieren digestión en columna, reducir el riesgo de degradación del ARN.

El kit RNA Fast Purification permite la extracción de ARN bacteriano total (Incluyendo ARN nuclear y ARN citoplasmático.) dentro 1 hora. El ARN extraído se puede utilizar directamente para RT-PCR, transferencia Northern, etc.. Todo el proceso de purificación no implica reactivos tóxicos como el fenol-cloroformo., haciendo que el kit de purificación de ARN sea adecuado para varios tipos de muestras.

5. Principios y procedimientos experimentales

6. Proceso de extracción

Precauciones antes de comenzar el experimento.:

A. Antes de usar, agregue la cantidad especificada de etanol absoluto a Tampón de lavado 1 como se indica en la etiqueta del frasco de reactivo, y marcar con una marca de verificación para indicar la adición de etanol absoluto.

B. El tampón de elución es un 0.1x solución TE que contiene una cantidad mínima de EDTA. Si el EDTA puede afectar experimentos posteriores, se recomienda reemplazar el tampón de elución con agua desionizada estéril.

1. Procesamiento de muestras:

A. bacterias grampositivas: Centrifugar la suspensión bacteriana a 4 ℃., 12,000 rpm para 2 minutos, recolectar células bacterianas (1.53 ml), descartar el sobrenadante, agregar 100µl de lisozima (10mg/ml), mezclar bien las células bacterianas, e incubar a temperatura ambiente durante 15-30 minutos.

B. bacterias gramnegativas: Centrifugar la suspensión bacteriana a 4 ℃., 12,000 rpm para 2 minutos, recolectar células bacterianas (1.53 ml), descartar el sobrenadante, agregar 10µl de lisozima (10mg/ml), mezclar bien las células bacterianas, e incubar a temperatura ambiente durante 3-5 minutos.

2.Agregar 400µl de tampón de extracción de ARN I, vortex para mezclar bien.

3. Transfiera el lisado a una columna de purificación de aclaramiento de ADN., centrifugar en 13,000 rpm para 2 minutos, recoger el filtrado (El ARN está presente en el filtrado.).

4. Estimar con precisión el volumen del filtrado., agregar 0.5 veces el volumen de etanol absoluto, mezclar bien; si ocurre precipitación, No afecta a experimentos posteriores..

5. Añadir el líquido obtenido a la columna de purificación de extracción de ARN. (aproximadamente 650~700μl cada vez), centrifugar a más de 8,000 rpm para 1 minuto, Deseche el líquido de desechos recolectados, y vuelva a insertar el tubo de recolección en la columna de purificación de extracción de ARN para el siguiente paso.

6. Repita el paso 5, agregue el líquido restante a la columna de purificación de extracción de ARN, centrifugar a más de 8,000 rpm para 1 minuto, Deseche el líquido de desechos y el tubo de recolección.

7. Coloque la columna de purificación de extracción de ARN en un nuevo tubo de recolección, agregar 600µl de tampón de eliminación de inhibidores, centrifugar a más de 8,000 rpm para 1 minuto, Deseche el líquido de desechos, y vuelva a insertar la columna de purificación de extracción de ARN en el tubo para el siguiente paso.

8. Agregar 700µl de tampón de lavado 1 a la columna de purificación de extracción de ARN, centrifugar en 14,000 rpm (20,000×g) para 2 minutos, Extienda el tiempo de centrifugación adecuadamente para garantizar que la membrana esté completamente seca..

(Nota: Confirme que se haya agregado etanol absoluto al tampón de lavado. 1. La presencia de etanol tiene un grave impacto en experimentos posteriores., por lo que el secado de la membrana es crucial. Después de la centrifugación, Asegúrese de que no haya etanol presente antes de la elución.. Deseche el líquido residual y el tubo de recolección..

Después del lavado con Wash Buffer 1, La membrana de la columna de purificación y extracción de ARN solo debe tener un ligero color.. Después de la centrifugación, Retire con cuidado la columna de purificación de extracción de ARN sin tocar el tubo de recolección para garantizar que no haya interferencias con el etanol..)

9. Coloque la columna de purificación de extracción de ARN en un nuevo tubo de centrífuga., goteo 100 µl de tampón de elución sobre la membrana, incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos (15°C~25°C), centrifugar a más de 8,000 rpm para 1 minuto.

(Nota: Elución de ARN con 50 µl de tampón de elución puede aumentar la concentración de ARN pero disminuir el rendimiento total de ARN.)

10. Repita el paso anterior.

(Nota: Se puede utilizar un nuevo tubo de centrífuga para recoger el ARN eluido la segunda vez., o se puede usar el tubo de recolección original para continuar recolectando ARN.)