Tissue DNA/RNA Extraction Kit

1. Bestandteile des Reagenzienkits

Spezifikationen	50T	100T
Katze. NEIN.	SN0329	SN0330
DNA-Reinigungssäulen (Satz)	50 (Satz)	100 (Satz)
RNA -Extraktionssäulen (Satz)	50 (Satz)	100 (Satz)
RNA-Extraktion Puffer I	30 ml	2×30 ml
RNA Extraction Buffer IV	30 ml	2×30 ml
Inhibitorentfernungspuffer	2×30 ml	4×30 ml
Waschpuffer 1	2×15 ml	3×15 ml
Elutionspuffer	20 ml	20 ml
Proteinase K	1ml	2x1ml
Bedienungsanleitung	1	1

 

2. Lagerung

Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25℃) in a dry condition and is stable for 12 Monate. Proteinase K contains a stabilizer, allowing it to be transported at room temperature; Jedoch, zur Langzeitlagerung, es sollte bei -20℃ gehalten werden.

3. Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits

3.1 Dieses Kit ist für molekularbiologische Forschungszwecke bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.

3.2 Einige Bestandteile des Kits enthalten Reizstoffe; Es ist ratsam, die erforderlichen Vorsichtsmaßnahmen zu treffen (wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrillen).

3.3 Die Verwendung dieses Kits erfordert zusätzliche Ausrüstung wie eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, flüssiger Stickstoff, Chloroform, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren.

4. Einführung in das Reagenzienkit

The sample DNA/RNA simultaneous isolation and purification kit provide a fast and efficient purification solution for tissue sample DNA/RNA. This kit offers two sets of lysis systems, suitable for various sample tissues and cells, including most plants, Tiere, Bakterien, usw.

The DNA/RNA rapid purification kit can extract total DNA/RNA from samples within 1 Stunde. The extracted DNA/RNA can be directly used for RT-PCR, Northern Blot, usw. Der gesamte Reinigungsprozess erfordert keine giftigen Reagenzien wie Phenolchloroform.

5. Experimentelle Prinzipien und Verfahren

6. Extraktionsprozess

Vorsichtsmaßnahmen vor Beginn des Experiments:

A. Prior to use, Fügen Sie die angegebene Menge an absolutem Ethanol hinzu WaschenPuffer 1 Nach dem Etikett auf der Reagenzienflasche, and mark a check on the label to indicate the addition of absolute ethanol.

B. Elutionspuffer ist ein 0.1x TE-Lösung with a minimal amount of EDTA. Ob EDTA einen Einfluss auf nachfolgende Experimente hat, Es wird empfohlen, als Ersatz für den Elutionspuffer steriles entionisiertes Wasser zu verwenden.

C. RNA Extraction Buffer I is designed for the extraction of plant and fungal samples, while RNA Extraction Buffer IV is primarily used for animal tissues, Blut, and other sample tissues.

1. Probenverarbeitung:
2. Plant/animal tissue materials: Collect samples using liquid nitrogen, grind the collected material directly in liquid nitrogen, and proceed to step 2 (recommended to use RNA Extraction Buffer I).
3. Cell tissues: Centrifuge and collect <107 suspended cells in a 1.5 ML Zentrifugenröhre, quickly proceed to step 2 (recommended to use RNA Extraction Buffer III).
4. Hinzufügen 500μl RNA Extraction Buffer I/RNA Extraction Buffer IV, 10μl Proteinase K, vortex and mix thoroughly. Ensure gentle mixing in this step to prevent mechanical cutting of tissue DNA and reduce DNA yield.
5. Transfer the lysate to a DNA-Reinigung column, Zentrifuge bei 13,000 U/min für 2 Protokoll, Sammeln Sie das Filtrat (Im Filtrat ist RNA vorhanden). An dieser Stelle, DNA is adsorbed on the DNA column and can be briefly stored at 4°C while simultaneously collecting RNA in the next steps.

(Notiz: If the sample is plant tissue, Zentrifuge bei 13,000 U/min für 10 Protokoll, and add the supernatant to the DNA binding column.)

4. Precisely estimate the volume of the filtrate, hinzufügen 5 times thevolume of absolute ethanol, gründlich mischen. Wenn Niederschlag auftritt, es hat keinen Einfluss auf nachfolgende Experimente.
5. Geben Sie die erhaltene Flüssigkeit in die RNA-Extraktions-Reinigungssäule (jeweils etwa 650–700 μl), Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die gesammelte Abfallflüssigkeit, und setzen Sie das Sammelröhrchen für den nächsten Schritt wieder in die Reinigungssäule ein.
6. Schritt wiederholen 5, Geben Sie die restliche Flüssigkeit in die RNA-Extraktions-Reinigungssäule, Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute, discard the waste liquid and collection tube, place the RNA extraction purification column in a new collection tube, and prepare for simultaneous collection of DNA.
7. Hinzufügen 600μl -Inhibitorentfernungspuffer to the DNA extraction purification column and RNA extraction purification column, Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit, and reinsert the DNA/RNA purification column into the collection tube for the next step.
8. Hinzufügen 700μl Waschpuffer 1 to the DNA extraction purification column and RNA extraction purification column, Zentrifuge bei 14,000 U/min (20,000×g) für 2 Protokoll. Extend centrifugation time appropriately to ensure the membrane is thoroughly dried.

(Notiz: Bestätigen Sie, dass das absolute Ethanol hinzugefügt wurde, um den Puffer zu waschen 1. The presence of ethanol has a significant impact on subsequent experiments, Daher ist die Membrantrocknung von entscheidender Bedeutung. Nach Zentrifugation, ensure no ethanol is present before elution, then discard the waste liquid and collection tube.

Nach dem Waschen mit Waschpuffer 1, the membrane of the RNA purification column should only have a slight color. Nach Zentrifugation, carefully remove the RNA purification column, ensuring no contact with the collection tube to avoid ethanol interference.)

9. Place the DNA/RNA purification column into a new centrifuge tube, tropfen 50-100 μl Elutionspuffer auf die Membran auftragen, bei Raumtemperatur inkubieren für 5 Protokoll (15°C-25°C), Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute.

(Notiz: Eluting nucleic acids with 50 μl Elution Buffer can increase the nucleic acid concentration but decrease the total nucleic acid yield.)

• Notiz:

1. Allgemein, larger elution volumes result in higher elution efficiency, but to increase nucleic acid concentration, the elution volume can be reduced, but not below 50 μl.
2. RNA, in the presence of RNA Extraction Buffer I/RNA Extraction Buffer III, is not degraded by RNAse but should be distinguished from DNA in subsequent experiments. Use RNAse-free consumables for RNA separation whenever possible.