Solarbio Gesamte antioxidative Kapazität (T-AOC) Assay-Kit

Gesamte antioxidative Kapazität (T-AOC) Assay-Kit

Notiz: Nehmen Sie vor dem Test zwei oder drei verschiedene Proben zur Vorhersage.

Betriebsausrüstung: Spektrophotometer

Katze nein: BC1310

Größe：50T/48S

Komponenten:

Lösung extrahieren: Flüssig 50 ml×1. Lagerung bei 4℃, Vorkühlung vor dem Gebrauch.

Reagenz I: Flüssig 35 ml×1. Lagerung bei 4℃.

Reagenz II: Flüssig 20 ml×1. Speicher bei 4 ℃ im Schatten.

Reagenz III: Flüssig 5 ml×1. Speicher bei 4 ℃ im Schatten.

Standard: Pulver×1, 10 mg Feso4 · 7H2O. Funktionierende Lösung: hinzufügen 0.9 ml destilliertes Wasser und 20 μl konzentrierter Schwefelsäure (H2SO4) Formen 40 µmol/ml feso4 Standardlösung. Lösungsmischung (Bereiten Sie sich vor, wenn die Lösung verwendet wird): Reagenz I : Reagenz II: Reagenz III = 7:1:1, vor dem Gebrauch bei 37 ℃ inkubieren.

Produktbeschreibung:

Dieses Kit wird verwendet, um die gesamten Antioxidationspegel von Antioxidantien und Antioxidationsenzymen in den Proben nachzuweisen. Es wird hauptsächlich in der Untersuchung von biologischem verwendet, Medizinische und pharmazeutische Studien zur Nachweis der gesamten antioxidativen Kapazität von antioxidativen Lösungen.

In der säureumgebung, Fe3+ -tptz werden auf blau Fe2+ -tptz reduziert. Die Farbreaktion spiegelt die gesamte antioxidative Kapazität wider.

Erforderliche, aber nicht bereitgestellte Reagenzien und Ausrüstung:

Spektrophotometer, Wasserbad konstanter Temperatur, Niedrige Temperaturzentrifuge, 1 ML Glaskuvette und destilliertes Wasser.

Verfahren:

ICH. Probenvorbereitung:

1. Serum, Plasma, Speichel, oder Urinproben

Plasma (Antikoagulation mit Heparin oder Natriumcitrat, Vermeiden Sie die Verwendung von EDTA), Zentrifuge bei 5000 Drehzahl/min für 10 Mindest, Nehmen Sie den Überstand zum Test. Nehmen Sie Serum, Speichel- oder Urinproben zur direkten Bestimmung. Auch, Sie können bei -80 ℃ speichern und innerhalb erkennen 30 Tage.

2. Zellen oder Gewebe Probe

Nehmen 1-2 Millionen Zellen oder 0.1 G Gewebe, hinzufügen 1.0 ml Extraktlösung. Verwenden Sie Homogenat oder Ultraschall, um Zellen vollständig aufzubrechen und Antioxidans freizusetzen, Zentrifuge bei 10000 r/min und 4 ℃ für 5 Mindest, Nehmen Sie den Überstand zum Test. Messen Sie bei Bedarf die Proteinkonzentration.

II. Bestimmungsverfahren:

1. Verdünnen 40 μmol/ml feso4 Standardlösung an 0.1, 0.05, 0.025, 0.0125, 0.00625, 0.003125 μmol/ml, nehmen 500 μl Standardlösung (destilliertes Wasser zur leeren Kontrolle), Hinzufügen zu 500 μl von Reagenz II II. Gründlich mischen für 10 Mindest, die Absorption erkennen in 593 nm, Berechnen Sie ΔA = AS-AB. (ALS: Standard -Lösungsrohr, AB: Leer -Steuerrohr.) Die Endkonzentration von Fe2+ ist 0.05、0.025、0.0125、0.00625、

0.003125、0.00156 μmol/ml.

2. Das Spektrophotometer vorheizen 30 Mindest, Wellenlänge anpassen 593 nm und mit destilliertes Null einstellen
3. Fügen Sie Reagenzien mit der folgenden Liste hinzu:

Reagenzname	Leeres Rohr (AB)	Reagenzglas (BEI)
Lösungsmischung (μL)	900	900
Probe (μL)		30
Doppelt destilliertes Wasser (μL)	120	90
Gründlich mischen und reagieren für 10 Mindest, Mit destilliertem Wasser auf Null stellen, die Absorption erkennen in 593 nm. Berechnen Sie ΔA ’= at – AB. (Notiz: Die leere Röhre muss in jedem Experiment nur ein- oder zweimal getestet werden)

III. Berechnung:

1. Erstellen Sie eine Standardkurve

Nehmen Sie die Fe2+ Endkonzentration als X-Achse, △ A als y-Achse, Standardkurve erstellen, Holen Sie sich lineare Regressionsgleichung y = kx+ b, Nehmen Sie ΔA‘ in die Gleichung, um x zu bekommen (μmol/ml).

2. Einheitendefinition: Die Probe -Antioxidationskapazität wird durch die Standard -Flüssigionenkonzentration angezeigt, die für die gleiche Absorptionsänderung erforderlich ist(ΔA).

A. Protein Konzentration:

Gesamte antioxidative Kapazität (μmol/mg Prot) = x × vrv ÷ (VS × CPR) = 34 × x ÷ CPR

B. Probe Gewicht

Gesamte antioxidative Kapazität (μmol/g Gewicht) = x × vrv ÷ (Vs ÷ vsv × w) = 34 × x ÷ w

C. Zelle Menge

Gesamte antioxidative Kapazität (μmol/104Cell) = x × vrv ÷ (Vs × vsv ÷ n) = 34 × x ÷ n

D. Lösung Volumen

Gesamte antioxidative Kapazität (μmol/ml) = x × vrv ÷ vs = 34 × x

Seil: Gesamtreaktionsvolumen, 1.02 ml; Vs: Probenvolumen, 0.03 ml;

VSV: Extraktionsvolumen, 1 ml; W: Probengewicht, G;

Cpr: Probenproteinkonzentration, mg/ml;

N: Zellmenge, Einheit basierend auf 104 (zehntausend).

Notiz:

1. Reagenz II ist dem menschlichen Körper irritiert, Bitte tragen Sie Laborkleidung und Latex
2. Die Proben sollten unter saurem Zustand nicht blau erscheinen, oder stört das Beispiel Ergebnis der
3. Waschmittel wie Tween, Triton, NP-40 und Reduktionsmittel wie DTT, Mercapto Ethanol sollte nicht in die hinzugefügt werden
4. Wenn der von der Probe bestimmte Absorptionswert über den Standardkurvenbereich hinausgeht, Die Probe sollte vorher richtig verdünnt oder konzentriert werden
5. Das Kit sollte bei 2-8 ℃ gelagert werden.

Beispiele:

1. Fügen Sie 0,1 g Shamrock zu 1 ml Extraktlösung hinzu und mahlen Sie gründlich auf Eis, Überstand nehmen, Befolgen Sie das Bestimmungsverfahren zum Betrieb, Mit 96-Well-Flachbodenplatten zum Berechnen: ΔA = a(T)-A(B)= 0,909-0,148 = 0,761, Standardkurve: y = 21,056x-0.0087, Berechnen Sie x = 0,037, gemäß der Masse der Probe zur Berechnung der gesamten Antioxidationskapazität (μmol/g Masse) = 34 × x ÷ W = 34 × 0,037 ÷ 0,1 = 12,85 μmol/g Masse.

Verweise：

[1] Pellegrini n, Serafini m, Salvatore s, et al. Gesamt Antioxidationskapazität von Gewürzen, getrocknete Früchte, Nüsse,

Impulse, Getreide, und in Italien konsumierte Süßigkeiten, die von drei verschiedenen In -vitro -Assays bewertet wurden[J]. Molekulare Ernährung & Lebensmittelforschung, 2006, 50(11): 1030-1038.

Verwandte Produkte:

BC1320/BC1325 Hydroxyl Radical Scavenging -Kapazitäts -Assay -Kit

BC1330/BC1335 Pflanzenflavonoide Assay -Kit

BC1340/BC1345 Pflanzen Gesamtphenol (Tp)Assay-Kit

BC1350/BC1355 PLANT Proanthocyanidins Assay Kit