Leberlipase (HL) Aktivitätstest-Kit

Notiz: Nehmen Sie vor dem Test zwei oder drei verschiedene Proben zur Vorhersage.

Betriebsausrüstung: Spektrophotometer

Katze nein: BC2380

Größe:50T/24s

Komponenten:

Reagenz I: 100 ml×1. Lagerung bei 4℃.

Reagenz II: 3 ml×1. Lagerung bei 4℃.

Reagenz III: Pulver×1. Lagerung bei 4℃. Vor Gebrauch, hinzufügen 30 ml destilliertes Wasser, vollständig auflösen.

Reagenz IV: Pulver×2. Lagerung bei -20℃. Vor Gebrauch, hinzufügen 2 ml destilliertes Wasser zu dem einen, vollständig auflösen. Das gelöste Reagenz kann bei gelagert werden -20 °C nach dem Umpacken. Vermeiden Sie wiederholte Frost-Tau-Zyklen;

Standard: Pulver×1. Vor Gebrauch, 6.94 ml von Aceton wird hinzugefügt, um a vorzubereiten 10 μmol/ml α-Naphthol

Standardlösung, das vor der Verwendung vollständig aufgelöst wurde.

Produktbeschreibung:

Leberlipase (HL) ist ein lipolytisches Enzym, das in Leberparenchymzellen synthetisiert wird. Es ist auf der Oberfläche der Sinusendothelzellen der Leber und der Oberfläche der Hepatozyten-Mikrovilli im Sinusraum vorhanden, und kann verschiedene Lipoproteine ​​hydrolysieren. Die Triglyceride (Tg) und Phospholipide (PL) Im Medium verändern sich Größe und Dichte verschiedener Lipoproteinpartikel. Wenn das HL und seine Aktivität im Plasma zunimmt, es kann zu Lipoprotein niedriger Dichte führen (LDL) Konzentrationen im Plasma, erhöhen und beschleunigen das Auftreten und die Entwicklung von Arteriosklerose.

HL hydrolysiert α-Naphthylacetat, um α-Naphthol zu erzeugen, das mit echtem blauen B-Salz eine purpurrote Azoverbindung bilden kann. Es hat einen charakteristischen Absorptionspeak bei 595 nm, und seine Farbtiefe korreliert innerhalb eines bestimmten Bereichs positiv mit der Leberesteraseaktivität.

Erforderliche, aber nicht bereitgestellte Reagenzien und Ausrüstung:

Spektrophotometer, Wasserbad, Gleichgewicht, Zentrifuge, verstellbarer Transferpettor, 1 ML Glass Cuvette, Mörtel/Homogenisator, Ultraschallbrecher, Eis und destilliertes Wasser.

Verfahren:

ICH. Enzym Extraktion

1. Gewebe

Entsprechend der Gewebemasse (G): das Volumen von Reagenz I (ml) Ist 1:5~10 zum Extrahieren. Es wird empfohlen, hinzuzufügen 1 ml Reagenz I zu 0.1 G Gewebe, und im Eisbad vollständig homogenisieren. Bei 10.000 g zentrifugieren 10 Minuten bei 4 ℃, um unlösliche Materialien zu entfernen, und nehmen Sie den Überstand vor dem Testen auf Eis.

2. Bakterien oder Zellen

Je nach Bakterien oder Zellen (104): das Volumen von Reagenz I (ml) ist 500 ~ 1000:1. Es wird empfohlen, hinzuzufügen 1 ml Reagenz I zu 5 Millionen von Bakterien oder Zellen. Nutzen Sie Ultraschall zur Spaltung von Bakterien und Zellen (auf Eis gelegt, Ultraschallleistung 300W, Arbeitszeit 3s, Intervall 7s, Gesamtzeit 3 Mindest). Zentrifuge bei, 10000G für 10 Minuten bei 4 °C, um unlösliche Materialien zu entfernen, und stellen Sie den Überstand vor dem Test auf Eis.

3. Kulturmedium oder andere Flüssigkeit: Direkt erkennen.

II. Erkennung

• Spektrophotometer vorheizen 30 Protokoll, Passen Sie die Wellenlänge an 595 nm, Mit destilliertem Wasser auf Null stellen.
• Reagenz III länger als 30 °C vorheizen 20 Protokoll.
• Standard: Verdünnen Sie die 10 μmol/ml-Standardlösung auf 1.25, 0.625, 0.3125, 0.15625, 0.078μmol/ml mit Reagenz I.
• Fügen Sie die folgenden Reagenzien hinzu 1.5 ml-EP-Röhrchen:

	Kontraströhre (C)	Reagenzglas (T)	Standardrohr (S)	Leeres Rohr (B)
Probe (μL)	100	100	–	–
Standardlösung (μL)	–	–	100	–
Reagenz I (μL)	450	400	400	500
Reagenz II (μL)	–	50	50	50
Mischen und reagieren lassen 10 min. bei 30℃			–	–
Reagenz III (μL)	400	400	400	400
Reagenz IV (μL)	50	50	50	50
Gründlich mischen und die Absorption messen 595 nm, als AC aufzeichnen, BEI, AS bzw. AB. ΔAT=(AT-AC), ΔAS=(AS-AB). Für jedes Reagenzglas wird ein Kontraströhrchen benötigt, und die Standardkurve muss nur ein- oder zweimal getestet werden.

III. Berechnung:

1.Standardkurve

Die Konzentration der Standardlösung als x-Achse, ΔAS als y-Achse, Erhalten Sie die Gleichung y=kx+b. Nehmen Sie ΔAT in die Gleichung ein, um x zu erhalten (μmol/ml) Wert.

2. Berechnung

• Gewebeproteinkonzentration

Einheitendefinition: Eine Einheit Enzymaktivität ist definiert als die Menge an Enzym, die durch die Hydrolyse von α-Naphthylacetat entsteht 1 μmol α-Naphthol pro mg Protein im Reaktionssystem pro Minute bei 40℃.

HL-Aktivität (U/mg-Schutz)=x×Vs÷（Vs×Cpr）÷T =0,1x÷ Cpr

• Gewebegewicht

Einheitendefinition: Eine Einheit Enzymaktivität ist definiert als die Menge Enzym, die durch die Hydrolyse von α-Naphthylacetat erzeugt wird 1 μmol α-Naphthol pro Gramm Gewebe im Reaktionssystem pro Minute bei 40℃.

HL-Aktivität (U/g-Gewicht) = x×Vs÷(W×Vs÷Ve)÷T =0,0333x÷ W

• Flüssig

Einheitendefinition: Eine Einheit Enzymaktivität ist definiert als die Menge an Enzym, die durch die Hydrolyse von α-Naphthylacetat entsteht 1 μmol α-Naphthol pro Milliliter flüssiger Probe im Reaktionssystem pro Minute bei 40℃.

HL-Aktivität (U/ml) =x× Vs÷Vs÷T=0,1x

• Bakterien oder kultivierte Zellen

Einheitendefinition: Eine Einheit Enzymaktivität ist definiert als die Menge an Enzym, die durch die Hydrolyse von α-Naphthylacetat entsteht 1 μmol α-Naphthol alle 104 Zellen oder Bakterien im Reaktionssystem pro Minute bei 40℃.

HL-Aktivität (U/104 -Zelle) =x× Ve÷ Zellmenge÷ T= 0,1x÷ Zellmenge

Vs: Probenvolumen (ml), 0.1 ml; Ve: Lösungsvolumen extrahieren, 1 ml;

Cpr: Proteinkonzentration der überstehenden Probe (mg/ml); T: Reaktionszeit (Mindest), 10 Protokoll;

W: Probengewicht, G;

Zellmenge: 10 Tausend als Einheit.

Notiz:

1. Wenn es sich bei der Probe um Tierleber handelt, Es wird empfohlen, die Probe mit Reagenz I stärker zu verdünnen 25 Mal vor dem Test, und multiplizieren Sie den Verdünnungsfaktor in der Berechnung
2. Wenn es sich bei der Probe um Serum oder Plasma von fettleibigen Tieren handelt, Es wird empfohlen, die Probe mit Reagenz I stärker zu verdünnen 5 Mal vor dem Test, und multiplizieren Sie den Verdünnungsfaktor in der Berechnung
3. Wenn ΔA größer ist als 0.8, Es wird empfohlen, die Probe nach Verdünnung mit dem Reagenz zu messen, und multiplizieren Sie es mit dem Verdünnungsfaktor in der Berechnung

Experimentelles Beispiel:

1. 1Zur Probenverarbeitung wurde g Rattenleber entnommen, und der Überstand wird verdünnt 24 mal, Anschließend wird die Operation gemäß den Operationsschritten ausgeführt. Gemessen und berechnet von 96 Brunnenplatte: ΔA = AT-AB = 0,713-0,001=0,712, und die Standardkurve: y = 0,6381x – 0.0005, Berechnen Sie x = 1,1166

HL-Aktivität (U/g-Masse) = x×VS ÷ (W×VS ÷ VST)÷ T ×48 = 53.597 U/g-Masse.

2. Nachdem das Truthahnserum verdünnt wurde 6 mal, Die Operation wurde gemäß den Operationsschritten durchgeführt. Gemessen und berechnet von 96 Brunnenplatte: ΔA = AT-AB =0,572-0,003=0,569, und die Standardkurve: y = 0,6381x – 0.0005, Berechnen Sie x =892

HL-Aktivität (U/g-Masse) = x×VS ÷ (W×VS ÷ VST)÷ T ×12 = 1.071 U/g-Masse

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