Solarbio Coomassie (Bradford) Protein-Assay-Kit 50T

Katze Nr.: PC0015

Größe: 50T

Lagerung: Versiegelungserhaltung nach dem Öffnen, Dieses Kit ab dem Datum der Bestellung ist neun Monate gültig.

Beschreibung

Coomassie G-250-Farbstoff ist ein kolorimetrisches Reagenz, das zum Nachweis und die Quantifizierung des Gesamtproteins verwendet wird. In einem sauren Medium -Coomassie -Farbstoff bindet Protein, das eine sofortige Verschiebung der Absorptionsmaximum von 465 nm bis 595 nm mit einer gleichzeitigen Farbänderung von grün zu blau verursacht. In einem bestimmten Konzentrationsbereich, Der gemessene Absorptionswert A595 liegt in direktem Verhältnis zur Proteinkonzentration.

Protokoll

• MikroplatteLeser
  1. BSA -Standard vollständig auflösen, 10ul bis 250ul verdünnen, die Endkonzentration von 0,2 mg/ml. Der Verdünnungspuffer war abhängig von der gemessenen Proteinprobe. Um der Einfachheit willen, vorgeschlagen, 0,9%NaCl oder PBS zu verwenden.
  2. 5× g250mix weit vor 1ml 5 × g250 verdünnt mit 4ml ddh2o. 1× G250 -Lösung kann eine Woche bei 4 ℃ sparen.
  3. Der Standard nach 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, und 20ul zu 96 Well -Tellern hinzugefügt, und PBS -Verdünnung zu ergänzen.
  4. Die Probe verdünnen(Bereiten Sie ein paar Gradienten vor, wie zum Beispiel 2 mal, 4 mal, 8 Zeitverdünnung), und fügen Sie 20ul -Probe zu hinzu 96 Also. Fehler vermeiden, Beispielpunkte müssen nach der Standardlinie von festgelegt werden 1/2.
  5. Fügen Sie jeweils 200ul mit 1 × G250 zu jedem Brunnen hinzu, Raumtemperatur für 3-5 Min.
  6. Bestimmung der Absorption.
  7. Berechnen Sie nach der Standardkurve das Probenprotein

• UV-visSpektrophotometer

1. 8*10ML Zentrifugenröhre(oder mehr) und mit 1 ~ 8 gekennzeichnet.
2. 100ul BSA mit 2,4 ml PBS bis 2 mg/ml verdünnen.
3. 5× g250 mischen Sie vor dem Gebrauch weit. 1ML 5 × G250 verdünnt mit 4ml DDH2O. 1× G250 -Lösung kann eine Woche bei 4 ℃ sparen.
4. Fügen Sie Reagenzien gemäß der folgenden Tabelle hinzu (Jede Brunnen 5ml, Das Extra wird verwendet, um die Küvette zu reinigen)

5. Messen Sie den OD -Wert nach 3 Minuten der Reaktion. Um die Genauigkeit des Experiments zu gewährleisten, Messen Sie jeden OD -Wert 2 Protokoll

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