BCA -Protein Assay-Kit

Katze: PC0020

Größe: 500T (Mikroplatten-Reader) / 50T (Spektrophotometer)

Lagerung: Der BSA-Proteinstandard wird bei 4℃ gelagert 3 Monate， oder bei -20℃ für 1 Jahr, andere Reagenzien bei Raumtemperatur aufbewahren 1 Jahr

Komponenten:

	500T (50T)	Lagerung
BCA-Reagenz	100ml	RT
Mit Reagenz	3ml	RT
PBS-Verdünnung	30ml	RT
BSA-Standard(5Mg/ml BSA)	1ml	-20℃

Produktbeschreibung:

• Das Prinzip des BCA-Protein-Assay-Kits:
  • Basierend auf der Reduktion von Cu^2+ zu Cu^+ durch Proteine.
  • BCA bildet unter alkalischen Bedingungen mit Cu^+ einen violett-blauen Komplex.
  • Die Absorption wird bei 562 nm erfasst.
  • Die Proteinquantifizierung erfolgt durch Vergleich der Absorption mit einer Standardkurve.
• Kompatibilität mit Reinigungsmitteln:
  • Gängige Reinigungsmittel wie Sicherheitsdatenblatt, Triton X-100, und Tween haben keinen Einfluss auf die Testergebnisse.
• Empfindlichkeit gegenüber bestimmten Wirkstoffen:
  • Beeinflusst durch Chelatbildner (EDTA, EGTA), Reduktionsmittel (DTT, Mercaptoethanol), und Lipide.
• Hohe Hintergrundüberlegungen:
  • Bei hohem Hintergrund aufgrund von Probenverdünnung oder Lysat, Erwägen Sie die Verwendung des Bradford Protein Assay Kit.

Protokoll

A. MikroplatteLeser

1. BCA-Arbeitslösung

Verdünnen 1 Volumen des Cu-Reagenzes mit 50 Volumen BCA-Reagenz (1:50). Wenn Niederschlag auftritt, es verschwindet nach dem Mischen. Das BCA-Arbeitsreagenz konnte bei RT aufbewahrt werden 24 Std..

2. BSA-Standardarbeitslösung

10 μl BSA verdünnen (5mg/ml) mit PBS bis 100μl (0.5mg/ml). Hinzufügen 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μl BSA-Standard-Arbeitslösung (0.5mg/ml) Zu 96 Brunnenplatten, Fügen Sie PBS hinzu, bis 20 μl erreicht sind.

3. Verdünnen Sie die Probe ordnungsgemäß. Es ist besser, mehrere Farbverläufe zu machen, wie zum Beispiel 2, 4, Und 8 Zeitverdünnung. 20 μl Probe in 96-Well geben

Notiz: Um Fehler in den Arbeitsschritten zu vermeiden, Stellen Sie sicher, dass sich der Probenpunkt bei befindet 1/2 so weit wie möglich hinter der Standardlinie liegen, da die Pipette bei der Entnahme einer kleinen Probenmenge einen großen Fehler aufweist, und der Punkt vor der Standardlinie ist möglicherweise nicht sehr genau.

4. BCA-Reaktion

Fügen Sie 200 μl BCA-Arbeitslösung hinzu 96 Brunnenplatten, und 15-30 Minuten bei 37℃ inkubieren. Messen

die Absorption bei 562 nm, und zeichnen Sie eine Standardkurve, um den Proteingehalt der Probe zu berechnen. Vermeiden Sie, dass die Wasserverdunstung die Testergebnisse beeinträchtigt, wenn Sie einen Inkubator verwenden.

B. Spektrophotometer

1. BCA-Arbeitslösung

Verdünnen 1 Volumen des Cu-Reagenzes mit 50 Volumen BCA-Reagenz (1:50). Wenn Niederschlag auftritt, es verschwindet nach dem Mischen. Das BCA-Arbeitsreagenz konnte bei RT aufbewahrt werden 24 Std..

2. BSA-Standardarbeitslösung

100 μl BSA verdünnen (5mg/ml) mit PBS bis 1 ml (0.5mg/ml).

3. Bereiten Sie acht vor (oder mehr) 5ml-Zentrifugenröhrchen, und fügen Sie die Reagenzien wie folgt hinzu:

Zentrifugenröhrchen Nr.	1	2	3	4	5	6	7 (Probe 1)	8 (Probe 2)	9 (Probe 3)
BSA-Standardarbeitslösung	0	40μl	80μl	120μl	160μl	200μl	200μl	200μl	200μl
PBS	200μl	160μl	120μl	80μl	40μl	0	0	0	0
BCA-Arbeitslösung	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml

Notiz

Inkubieren 37 ℃ für 15–30 Minuten. Messen Sie die Absorption bei 562 nm, und zeichnen Sie eine Standardkurve, um den Proteingehalt der Probe zu berechnen. Vermeiden Sie, dass die Wasserverdunstung die Testergebnisse beeinträchtigt, wenn Sie einen Inkubator verwenden.

1. Cu-Reagenz und PBS-Verdünnung können bei 2–8 °C gelagert werden, wenn das Reagenz längere Zeit nicht verwendet wird. Wenn das BCA-Reagenz bei niedrigen Temperaturen kristallisiert und ausfällt, Es kann bei 37℃ inkubiert werden, um sich vollständig aufzulösen, ohne seine Verwendung zu beeinträchtigen.
2. Wenn die Probe viele störende Substanzen enthält, Bitte verwenden Sie das BCA Protein AssayKit (PC0020).
3. Für Ihre Sicherheit und Gesundheit, Bitte tragen Sie Handschuhe und eine Mullmaske

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