Tauben-Herpesvirus (PiHV) Nukleinsäure-Testkit

Tauben-Herpesvirus (PiHV) Nukleinsäure-Testkit (PCR-Fluoreszenzsondenmethode)

Artikel-Nr： AP2308002 Spezifikation：24T/48T /96T Lagerung：-20℃

Produkteinführung：

• Tauben-Herpesvirus (PiHV) Infektion:
  • Virale Infektionskrankheit, die vor allem junge Tauben befällt und durch den Pigeon-Herpesvirus-Typ verursacht wird 1 (PiHV1).
  • Wichtiger Erreger, der bei jungen Tauben zum Taubentaubensyndrom führt.
  • Klinisch gekennzeichnet durch Symptome wie Nasen- und Bindehautentzündung, Depression, verminderter Appetit, Durchfall, Erbrechen, und neurologische Symptome.
• Bedeutung der Erkennung:
  • Früh, schnell, und die bequeme Erkennung von PiHV ist für die Diagnose von entscheidender Bedeutung.
  • Trägt dazu bei, die Ausbreitung der Krankheit zu verlangsamen und Komplikationen vorzubeugen.
• Beschreibung des Testkits:
  • Entwickelt basierend auf konservierten Sequenzen im PiHV-Gen.
  • Optimierte Bedingungen ermöglichen genaue quantitative Fluoreszenz-PCR-Tests.
  • Akzeptiert mündlich, und Kloakenabstriche, Blut, und andere Gewebeproben von Vögeln.
  • Ermöglicht die schnelle Bestimmung einer PiHV-Infektion im Wirt.

Produktinhalte：

Reagenzkomponenten	AP2308002-01 (24T)	AP2308002-02 (48T)
PiHV-Premix-Lösung	11.5µL/Well× 8Wells/Streifen× 3 Streifen	11.5µL/Well× 8Wells/Streifen× 6Streifen
PiHV-Reaktionslösung	290μL	575μL
PiHV-Positivkontrolle	100μL	100μL
Negativkontrolle	100μL	100μL

Lagerbedingungen：

Bei -20℃ lagern, Die Haltbarkeit beträgt mindestens 12 Monate.

Experimenteller Betrieb：

1. Probenvorbereitung (Probenvorbereitungsbereich)

1.1 Beispielanforderungen:

– Mund- und Kloakenabstriche: Nehmen Sie ein steriles Wattestäbchen, Führen Sie es in die Kehle oder Kloake des Vogels ein, dreimal drehen, Legen Sie es in ein Zentrifugenröhrchen, Schneiden Sie den freiliegenden Teil ab, Schließen Sie die Kappe fest, und beschriften Sie es. Proben, die zeitnah getestet werden können, sollten bei 2–8 °C gelagert werden 24 Std., und Proben, die nicht sofort getestet werden können, sollten bei -20 °C gelagert werden.

– Vollblut: Verwenden Sie EDTA als Antikoagulans, Vermeiden Sie das Antikoagulans Heparin, Verwenden Sie frisches Vollblut, oder nicht länger als bei 2-8°C lagern 7 Tage, oder nicht länger als bei -20°C lagern 3 Monate, Vermeidung wiederholter Frost-Tau-Zyklen.

– Gewebe: Nehmen Sie nicht mehr als 100 mg frisches Muskel- oder Organgewebe ein, Verwenden Sie 200–500 μl steriles Wasser, um das Gewebehomogenat vorzubereiten, und fahren Sie mit der anschließenden Probenvorbereitung fort.

1.2 Probenvorbereitung:

Weitere Informationen finden Sie im SanshiBio „Kit zur schnellen Extraktion tierischer genomischer DNA (zur PCR-Analyse)“ Handbuch (Katalog: DP202), oder andere Kits/Methoden zur Nukleinsäureextraktion, die die relevanten Anforderungen erfüllen, zur Nukleinsäureextraktion verarbeiteter Proben. Legen Sie die extrahierte Nukleinsäureprobe in einen Kühler und testen Sie sie so schnell wie möglich. Nicht länger als bei 4°C lagern 7 Tage oder bei -20°C für nicht mehr als 6 Monate.

2. Vorbereitung des Reaktionssystems (Reaktionsbereich)

2.1 Nehmen Sie jede Komponente des Kits heraus, bei Raumtemperatur vollständig auftauen, Zentrifuge für 10 Sekunden, und zentrifugieren Sie die Flüssigkeit innerhalb der Röhrchenwand und des Röhrchendeckels bis zum Boden des Röhrchens. Bereiten Sie die Reaktionslösung entsprechend der Probenmenge vor (n+2, wobei n die Anzahl der Proben ist, Es wird empfohlen, es einzurichten 1 Positivkontrolle und 1 Negativkontrolle für jedes Experiment). Spezifische Zubereitungsmethode: Nehmen (n+2) Reaktionsgefäße mit PiHV-Vormischungslösung, 11,5 µL PiHV-Reaktionslösung in jedes Röhrchen geben, Verwenden Sie zum gründlichen Mischen eine Pipette, 23µL pro Vertiefung, und in einem Kühler aufbewahren.

2.2 Fügen Sie dann nacheinander 2 μl Negativkontrolle hinzu, extrahierte Probennukleinsäure, und PiHV-Positivkontrolle zur Reaktionslösung. Schließen Sie den Röhrchendeckel, eine Aufnahme machen, und das Gesamtvolumen jeder Reaktion beträgt 25 μl. Gründlich mischen, Zentrifuge für 10 Sekunden, und führen Sie Amplifikationsexperimente auf dem PCR-Instrument durch.

3. PCR-Amplifikation (Bereich Amplifikation und Produktanalyse)

Vordenaturierung bei 95°C für 2 Protokoll; Denaturierung bei 95°C für 10 Sekunden, Glühen und Streckung bei 60°C für 35 Sekunden, 40 Fahrräder. Sammeln Sie Fluoreszenzsignale bei 60 °C. Wählen Sie den FAM-Fluoreszenzkanal (Verwenden Sie quantitative Echtzeit-Fluoreszenz-PCR-Instrumente wie die ABI-Serie, Falls benötigt, Wenden Sie sich an den Hersteller oder fügen Sie ROX-Korrekturfarbstoff hinzu; ansonsten, Befolgen Sie die normalen Verfahren).

4. Ergebnisinterpretation

4.1 Bedingungen für die Gültigkeit des Experiments:

Ct-Wert des FAM-Kanals der Positivkontrolle < 28 und ein „S“-Es wird eine geformte Verstärkungskurve beobachtet; Negativkontrolle hat keinen Ct-Wert oder Ct-Wert ≥ 38 und nein „S“-geformte Verstärkungskurve, Das Experiment ist gültig. Ansonsten, Wiederholen Sie das Experiment; wenn das Wiederholungsexperiment immer noch ungültig ist, Wenden Sie sich an das technische Personal des Herstellers.

4.2 Interpretation der Probenergebnisse:

Ct-Wert ≤ 33 und ein „S“-Die geformte Amplifikationskurve zeigt PiHV-positiv an;

Ct-Wert zwischen 33 < Ct < 38 gilt als verdächtig, und ein erneuter Test wird empfohlen. Wenn der FAM-Kanal erneut getestet wird, beträgt der Ct-Wert < 33 nach Ausschluss der Aerosolkontamination ergibt sich eine klare Verstärkungskurve, es gilt als PiHV-positiv, ansonsten als negativ angesehen;

Kein Ct-Wert oder Ct-Wert ≥ 38 und nein „S“-Die geformte Amplifikationskurve weist auf PiHV-negativ hin.

Vorsichtsmaßnahmen：

• Um eine Kontamination zu verhindern, Das Experiment sollte streng aufgeteilt sein, und eine physische Isolierung zwischen den Trennwänden wird bevorzugt, um eine Kreuzkontamination aufgrund menschlicher Faktoren zu vermeiden. Tragen Sie während des Experiments Laborkittel und Latexhandschuhe, Werkzeuge selbständig in verschiedenen Bereichen einsetzen, Wechseln Sie bei Bedarf Handschuhe und Laborkittel. Nach PCR, Öffnen Sie den Deckel nicht sofort; Öffnen Sie es nach ausreichender Abkühlung, um eine Aerosolkontamination zu minimieren.
• Tauen Sie die Reagenzien vor der Verwendung vollständig auf, aber vermeiden Sie wiederholte Frost-Tau-Zyklen. Die im Kit enthaltenen PCR-Reaktionsröhrchen haben ein Fassungsvermögen von 0,2 ml; wenn ein Austausch erforderlich ist, Transfer nach vollständigem Auftauen. Befolgen Sie strikt die Anweisungen zur Reagenzvorbereitung und Probenzugabe. Arbeitsplätze, Zentrifugen, Pipetten, und andere Instrumente sollten regelmäßig mit chlorhaltigen Desinfektionsmitteln desinfiziert werden, Alkohol, Nukleinsäure-Dekontaminationsmittel, oder UV-Licht.
• Ein negatives Ergebnis bedeutet nicht unbedingt, dass der Wirt nicht mit dem Virus infiziert ist. Schlechte Probenqualität, geringe Virenlast, oder das Vorhandensein stark hemmender Substanzen (wie Alkohol, Desinfektionsmittel, Antikoagulanzien, usw.) kann zu einer erfolglosen Nukleinsäureextraktion führen (Erkennung) und ein „Negativ“ Ergebnis. Befolgen Sie die Interpretationskriterien für die Ergebnisse, und wenn es verdächtige Ergebnisse gibt, Aerosolkontamination zunächst ausschließen. Falls es weitere Fragen gibt, Wenden Sie sich an das technische Personal des Herstellers.
• Dieses Produkt ist nur für den einmaligen Gebrauch bestimmt. Die Bestandteile des Reagenzes reagieren empfindlich auf natürliches Licht; Vermeiden Sie Lichteinwirkung während der Verpackung und Lagerung. Nach dem Verpacken, Nicht wiederholt einfrieren und auftauen. Nur für wissenschaftliche Forschungszwecke; nicht für die klinische Diagnose oder andere Zwecke.