Blut-Gesamt-RNA-Extraktionskit (Entfernung genomischer DNA)

1. Bestandteile des Reagenzienkits

2. Lagerung

Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25℃) in a dry environment and can be preserved for 12 Monate.

3. Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits

3.1 Dieses Kit ist für molekularbiologische Forschungszwecke bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.

3.2 Einige Bestandteile des Kits enthalten Reizstoffe; Es ist ratsam, die erforderlichen Vorsichtsmaßnahmen zu treffen (wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrillen).

3.3 Die Verwendung dieses Kits erfordert zusätzliche Ausrüstung wie eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, flüssiger Stickstoff, Chloroform, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren.

4. Einführung in das Reagenzienkit

The RNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying RNA from blood and other fluid tissues. It is suitable for most biological fluids and tissues. This RNA purification kit can be applied to blood samples exceeding 0.5 ml, and through DNA removal technology, the extracted RNA is virtually free of genomic DNA.

The RNA Fast Purification Kit allows for the extraction of total RNA (einschließlich nuklearer RNA und zytoplasmatischer RNA) aus Blut im Inneren 2 Std.. The purified RNA can be directly used for applications such as RT-PCR, Northern Blot, usw. Der gesamte Reinigungsprozess erfordert keine giftigen Reagenzien wie Phenolchloroform, making the RNA purification kit well-suited for various other sample types.

5. Experimentelle Prinzipien und Verfahren

6. Extraktionsprozess

Vorsichtsmaßnahmen vor Beginn des Experiments:

A. Vor Gebrauch, add the specified amount of ethanol to Wash Buffer 1 as indicated on the reagent bottle label, and mark a check on the label to indicate the addition of ethanol.

B.Elution Buffer is a 0.1x TE solution containing a minimal amount of EDTA. Wenn EDTA nachfolgende Experimente beeinflusst, it is recommended to use sterile deionized water as a substitute for the Elution Buffer.

1. Probenverarbeitung: Take 200μL of blood into an EP tube, hinzufügen 80μL of Red Blood Cell Lysis Buffer 10x, and mix thoroughly by pipetting.
2. Hinzufügen 500μL RNA Extraction Buffer 1 Plus, vigorously shake to mix, Zentrifuge bei 12000 U/min für 3 Protokoll.
3. Transfer the supernatant to a DNA-Reinigung column, Zentrifuge bei 12000 U/min für 1 Minute.
4. Hinzufügen 250μL of ethanol to the supernatant, pipette and mix, transfer the liquid to the RNA purification column, Zentrifuge bei 12000 U/min für 30 Sekunden, Den Überstand verwerfen.
5. Hinzufügen 600μL Inhibitor Removal Buffer zur RNA -Reinigungsspalte, Zentrifuge bei 12000 U/min für 30 Sekunden, Den Überstand verwerfen.
6. Hinzufügen 600μL Wash Buffer 1 zur RNA -Reinigungsspalte, Zentrifuge bei 12000 U/min für 30 Sekunden, Den Überstand verwerfen.

(Notiz: Confirm that ethanol has been added to Wash Buffer 1. Ethanol presence significantly affects subsequent experiments. daher, membrane drying is crucial. Nach Zentrifugation, ensure no ethanol remains before elution, then discard the waste and collection tube. Nach der Verwendung des Waschpuffer 1, the membrane on the RNA purification column should have a slight color. Nach Zentrifugation, carefully remove the RNA purification column, ensuring it does not touch the collection tube to prevent ethanol interference.)

7. Schritt wiederholen 6.
8. Centrifuge the empty tube at 12000rpm for 2 Protokoll (to evaporate residual ethanol).
9. Platzieren Sie die RNA -Reinigungssäule in eine neue Zentrifugenröhre, drip 100μL Elution Buffer onto the membrane, bei Raumtemperatur inkubieren für 5 Protokoll (15℃~25℃), Zentrifuge bei 12000 U/min für 1 Minute.

(Notiz: Eluting RNA with 50μL Elution Buffer can increase RNA concentration but reduce total RNA yield.)