Blutgenom-DNA-Extraktionskit

1. Bestandteile des Reagenzienkits

Spezifikationen	50T	100T
Katze. NEIN.	SN0219	SN0220
DNA-Extraktionssäulen (Satz)	50 (Satz)	100 (Satz)
Reagenzpuffer b	20 ml	2 × 20 ml
Reagenzpuffer C	30 ml	2 × 30 ml
10× rote Blutkörperchen -Lysepuffer	60 ml	2 × 60 ml
Waschpuffer 1	15 ml	2 × 15 ml
Elutionspuffer	20 ml	20 ml
Proteinase K	1ml	2x1ml
RNaseA	1ml	2x1ml
Bedienungsanleitung	1	1

2. Lagerung

Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25℃) und bei trockenen Bedingungen, mit einer Haltbarkeit von 12 Monate. Die DNA-Extraktions-Reinigungssäulen können aufbewahrt werden 1 Jahr in einer kühlen und trockenen Umgebung. Proteinase K und RNase A enthalten Konservierungsstoffe, ermöglicht den Transport bei Raumtemperatur, aber zur Langzeitlagerung, Sie sollten bei -20℃ aufbewahrt werden.

3. Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits

3.1 Dieses Reagenzienkit ist für die molekularbiologische Forschung bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.

3.2 Einige Komponenten im Reagenzienkit enthalten Reizstoffe. Schutzmaßnahmen wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrille werden empfohlen.

3.3 Während der Verwendung dieses Reagenzienkits, eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren müssen vom Benutzer vorbereitet werden.

4. Einführung in das Reagenzienkit

Das Blut DNA-Reinigung Das Reagenzkit bietet eine schnelle und wirksame Methode zur Reinigung von DNA aus Blut und anderen Körperflüssigkeiten. Durch Lysinierung von roten Blutkörperchen mit einem Lysepuffer mit roter Blutkörperchen, DNA kann effizient gesammelt werden.

 

Das Blut -DNA -Rapid -Reinigungskit kann die gesamte DNA aus Vollblut extrahieren (einschließlich Blut, Serum, Plasma, und andere Körperflüssigkeiten) innerhalb 30 Protokoll. Der gesamte Reinigungsprozess erfordert keine giftigen Reagenzien wie Phenolchloroform. Die extrahierte DNA kann direkt verwendet werden PCR, Southern Blot, und andere Anwendungen.

5. Experimentelle Prinzipien und Verfahren

6. Extraktionsprozess

Vor Beginn des Experiments:

A. Rote Blutkörperchen -Lyse -Puffer 1x -Präparation: Verdünnen Sie den 10-fach roten Blutkörperchen-Lysepuffer mit RNase-freier Wasser auf 1x Volumen.

B. Reagenzpuffer B und Reagenzpuffer C. kann bei niedrigen Temperaturen ausfallen. Es wird empfohlen, es auf 65℃ zu erhitzen 5 Minuten, um den Niederschlag vor dem Gebrauch aufzulösen.

C. Vor der Verwendung Waschpuffer 1, Geben Sie die angegebene Menge an wasserfreiem Ethanol hinzu, wie auf dem Etikett der Reagenzflasche angegeben, und markieren Sie eine Überprüfung des Etiketts, um die Ethanol -Addition anzuzeigen.

D. Elutionspuffer ist ein 0.1x TE-Lösung mit minimaler EDTA. Wenn EDTA nachfolgende Experimente beeinflussen könnte, Es wird empfohlen, den Elutionspuffer durch steriles entionisiertes Wasser zu ersetzen.

1. Probenhandhabung: (Sammeln 0.1-5 ML Blutproben)

A. Hinzufügen 2-3 mal das Volumen von 1x roter Blutkörperchen -Lysepufferzum Blut oder zur Probe (Verdünnen Sie den Lyse -Puffer der roten Blutkörperchen vor der Verwendung 10x bis 1x), gründlich mischen, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 1 Minute, Entfernen Sie den Überstand vorsichtig. Der Niederschlag sollte theoretisch weiß oder hellrot sein. Reagenzpuffer B zum Niederschlag hinzufügen (für 0,1-1ml Blutproben, hinzufügen 200μLReagenzpuffer b; für 1-2ml Blutproben, hinzufügen 400μL Reagenzpuffer b).

B. Wenn Sie Proben von Organismen mit niedrigem Niveau wie Geflügel oder Vögeln mit kernhaltigen roten Blutkörperchen abwickeln, Ein kleineres Probenvolumen wird benötigt. In solchen Fällen, Lassen Sie den 1x roten Blutkörperchen -Lysepuffer weg und fügen Sie direkt hinzu 400μLvon Reagenzpuffer B und 20μL von rnasea (10 mg/ml), gründlich mischen, und bei Raumtemperatur inkubieren für 5 Protokoll.

2. Hinzufügen 10μLRNaseA (10 mg/ml), 20μL Proteinase K (10 mg/ml), gründlich mischen, bei 65 ℃ verdauen für 10 Protokoll. Während dieser Zeit, umdrehen und mischen 2-3 Zeiten, bis die Verdauung abgeschlossen ist.

3. Hinzufügen 200μLvon Reagenzpuffer c zum Lysat, Mischen Sie durch Pipettieren, hinzufügen 200μL von wasserfreiem Ethanol, Mischen Sie durch Pipettieren.

4. Tragen Sie die erhaltene Flüssigkeit auf die DNA -Extraktionsreinigungssäule auf (Satz) (jedes Mal ungefähr 650 ~ 700 μl), Zentrifuge bei 12,000 U/min für 30 Sekunden, Entsorgen Sie den gesammelten Abfall, und geben Sie das Sammelrohr in die DNA-Extraktionsreinigungssäule erneut ein (Satz) für den nächsten Schritt.

5. Hinzufügen 700μLvon Hemmentfernungspuffer, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 30 Sekunden, Entsorgen Sie den Abfall.

6. Platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (Satz) in einem neuen Sammelrohr, hinzufügen 500μLWaschpuffer 1, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 30 Sekunden, Entsorgen Sie den Abfall, und die DNA-Extraktionsreinigungssäule erneut investieren (Satz) in das Sammelrohr für den nächsten Schritt.

(Notiz: Stellen Sie sicher 1.)

7. Schritt wiederholen 6.

8. Platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (Satz) in ein neues Zentrifugenröhrchen füllen, aufdecken, in einem Wasserbad bei 65 ° C für inkubieren 2 Protokoll. Erweitern Sie diesen Schritt angemessen, um Ethanol so weit wie möglich zu verdampfen, um zu verhindern, dass Ethanolreste nachgeschaltete Experimente beeinflussen.

9. Aussetzen 50-100μLvon Elutionspuffer auf die Membran der Säule, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 1 Minute, und sammeln Sie die DNA.

(Notiz: 1. Eluierende DNA mit 50μL von Elutionspuffer kann die DNA -Konzentration erhöhen, aber die GesamtdNA; 2. Die eluierte DNA -Wäsche kann wieder auf die DNA -Extraktionsreinigungssäule angewendet werden. Zentrifuge bei 12,000 U/min für 1 Minute wieder, um die DNA -Erträge zu erhöhenD.